《苦參鹼衍生物MASM及其結合蛋白RPS5抗炎作用及其機制的研究》是依託上海交通大學，由胥靜擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：苦參鹼衍生物MASM及其結合蛋白RPS5抗炎作用及其機制的研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：胥靜
- 依託單位：上海交通大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
本課題組前期研究發現苦參鹼衍生物MASM具有顯著的抗炎作用，通過調節巨噬細胞表型轉化來抑制促炎因子TNFα、IL-6、iNOS的釋放，對抗炎因子IL-10及Fizz1、Ym1等具有顯著促進作用，這一轉換作用的主要機制是MASM通過RPS5促進M1巨噬細胞向M2型轉化。本項目擬通過免疫共沉澱方法確定RPS5的結合蛋白為GSK3。又通過western blot、RT-PCR及小干擾等方法確定MASM通過靶向分子RPS5，使其結合蛋白GSK3活性改變，從而影響下游轉錄因子CREB的活性，改變C/EBPβ的轉錄，實現巨噬細胞M1向M2轉換，達到抗炎目的。比較野生型和巨噬細胞條件性敲除RPS5的小鼠在CLP和LPS模型中的差異，明確RPS5分子在炎症免疫反應中的重要作用。本課題揭示RPS5可能的分子機制，同時闡明MASM的分子機制，為膿毒症治療提供新的靶點。
結題摘要
我們從前期的實驗中發現苦參鹼衍生物MASM具有顯著的抗炎作用，能夠有效延長膿毒症小鼠生存期，降低膿毒症小鼠血清中炎症因子TNF-α、IL-6等的表達水平，減輕膿毒症小鼠的組織損傷，以及證明MASM的結合蛋白RPS5對炎症的影響。基於該研究基礎，本項目繼續探討MASM的抗炎機制，以及其結合蛋白RPS5對炎症的影響，從而闡明RPS5的抗炎作用機制。首先我們構建了巨噬細胞條件性敲除RPS5的基因敲除小鼠（Lyz2-Cre:RPS5flox/flox），發現在腹腔注射LPS（5mg/kg）12小時後，RPS5敲除的小鼠體內炎症因子較對照組有顯著的增加，並加重組織的損傷。從體內實驗中證實RPS5參與了體內炎症反應，可將其作為抗炎藥物設計的潛在靶點。其次在體外實驗中發現苦參鹼衍生物MASM具有調控巨噬細胞極化表型轉化的作用，通過調節RAW264.7小鼠巨噬細胞和小鼠骨髓衍生的巨噬細胞BMDM抑制M1型標誌物IL-6、TNF-α、NO的釋放，促進M2標誌物Fizz1、Ym1、CD206的表達以及Arginase的表達，說明MASM可通過調節巨噬細胞由M1型向M2型轉化來抑制炎症因子釋放，從而達到調劑炎症的作用。隨後，我們發現MASM可通過抑制NF-κB和PI3K/AKT信號通路，使下游CREB及其轉錄因子C/EBPβ的表達增加，抑制炎症因子釋放，達到調控巨噬細胞的極化反應的目的。RPS5作為MASM的結合蛋白，同樣也參與了巨噬細胞的極化反應。通過從條件性敲除RPS5小鼠體內取得的骨髓衍生的巨噬細胞證實在LPS/IFN-γ刺激的條件下，RPS5的下調使炎症因子表達進一步增加。藥物MASM則因RPS5的下調，其抗炎作用被阻斷。說明RPS5的下調部分削弱了MASM的作用，並使巨噬細胞向M1型轉化，提示RPS5對巨噬細胞的極化及炎症因子的表達都具有重要影響，並且證明MASM通過RPS5起到抗炎作用。從體內體外實驗中首次證明RPS5在抗炎免疫中的作用和可能的分子機制，為RPS5作為抗炎治療的靶點提供了依據，同時，明確MASM的分子機制，為其作為抗炎藥物的研究提供了理論意義。這不僅是藥物研究的創新，同時也是發現新的藥物靶點的創新，具有重要的理論意義和套用前景。
