芽孢染色

芽孢是芽孢桿菌屬和梭菌屬生長到一定階段形成的一種抗逆性很強的休眠體結構，通常為圓形或橢圓形。

芽孢壁厚、透性低，著色、脫色均較困難。因此，用著色力強的染色劑（如孔雀石綠）在加熱條件下進行染色時，染料不僅可以進入菌體，而且也可以進入芽孢，進入菌體的染料可經水洗脫色，而進入芽孢的染色的染料則難以透出，若再用復染液（如沙黃水溶液）染色後，芽孢仍然保留初染劑的顏色，而菌體被染成復染劑的顏色，即菌體和芽孢分別染成紅色和綠色易於區分。

基本介紹

• 中文名：芽孢染色
• 成分：芽孢桿菌屬和梭菌屬
• 形狀：圓形或橢圓形
• 顏色：孔雀石綠

染色方法

方法1

（1）將培養24小時左右的枯草芽孢桿菌或其他芽孢桿菌，作塗片、乾燥、固定。

（2）滴加3—5滴孔雀綠染液於已固定的塗片上。

（3）用木夾夾住載玻片在火焰上加熱，使染液冒蒸汽但勿沸騰，切忌使染液蒸乾，必要時可添加少許染液。加熱時間從染液冒蒸汽時開始計算約4—5分鐘。這一步也可不加熱，改用飽和的孔雀綠水溶液（約7．6%）染10分鐘。

（4）傾去染液，待玻片冷卻後水洗至孔雀綠不再褪色為止。

（5）用番紅水溶液復染1分鐘，水洗至水為無色。

（6）待乾燥後，置油鏡觀察，芽孢呈綠色，菌體呈紅色。

芽孢結構

注意

（1）選用適當菌齡的菌種，幼齡菌尚未形成芽孢，而老齡菌芽孢囊已經破裂。

（2）加熱染色時必須維持在染液冒蒸汽的狀態，加熱沸騰會導致菌體或芽孢囊破裂，加熱不夠則芽孢難以著色。

方法2

（1）取二支潔淨的小試管，分別加入0．2ml無菌水，再往一管中加入1—2接種環的蠟狀芽孢桿菌的菌苔，另一管中加入1—2接種環的生孢梭菌的菌苔，兩管各自充分混合成濃厚的菌懸液。

（2）在菌懸液中分別加入0．2ml苯酚品紅溶液，充分混合後，於沸水浴中加熱3—5分鐘。

（3）用接種環分別取上述混合液2—3環於兩片載玻片上，塗薄，風乾後，將載玻片稍傾斜於燒杯上，用95%乙醇沖洗至無紅色液流出。

（4）再用自來水沖洗，濾紙吸乾。

（5）取1—2接種環黑色素溶液於塗片處，立即展開塗薄，自然乾燥後，油鏡觀察，在淡紫灰色背景的襯托下，菌體為白色，菌體內的芽孢為紅色。