花生主要過敏原Ara h1與抗體相互作用機制的研究

《花生主要過敏原Ara h1與抗體相互作用機制的研究》是依託深圳大學，由黃海珍擔任項目負責人的青年科學基金項目。

基本介紹

• 中文名：花生主要過敏原Ara h1與抗體相互作用機制的研究
• 項目類別：青年科學基金項目
• 項目負責人：黃海珍
• 依託單位：深圳大學

項目摘要

本研究運用生物分子相互作用分析（BIA）方法，選用主要食品過敏原花生，在已克隆、表達和純化花生主要過敏原Ara h1的基礎上,運用表面電漿共振（SPR）技術，研究其與目標抗體分子之間的相互作用。通過研究花生主要過敏原（Ara h1）抗原分子在SPR感測片表面的吸附（或固定）、解離以及與免疫球蛋白抗體（IgE及IgG）、單克隆抗體和多克隆抗體之間的結合-解離過程，獲得花生過敏原(Ara h1)與不同類型抗體之間的結合位點、結合常數以及解離常數等參數，在分子水平上進一步探討花生主要過敏原的致敏機理，以及進一步闡明臨床過敏性疾病診斷的原理和途徑。.該研究基於抗原－抗體之間的特異性相互作用，通過捕獲有特異性作用的抗原或者抗體分子，大大降低了生物分子之間非特異性作用的影響，不論是在未知過敏原的檢測、過敏性疾病的臨床診斷、還是在過敏性疾病發病機理的研究方面都具有重大意義。

結題摘要

本研究運用陰離子交換層析法分離純化花生主要過敏原Ara h1蛋白，經酶聯免疫印跡法檢測其與花生過敏患者血清中IgE的結合能力，實驗結果表明該方法純化出的Ara h1蛋白具有良好的免疫學活性。以方法純化的Ara h1為配體製備親和層析柱，然後和Protein A親和層析柱分離出了人血清中抗Ara h1特異IgG與IgE。在此基礎上，運用表面電漿共振（SPR）技術，將純化的花生Ara h1分別與其特異抗體IgG與IgE進行表面電漿共振實驗，檢測二者之間的相互作用性，研究花生主要過敏原（Ara h1）抗原分子在SPR感測片表面的吸附（固定）、解離以及與免疫球蛋白抗體（IgE及IgG）與抗原之間的結合-解離過程，獲得花生過敏原(Ara h1)與不同類型抗體之間的結合位點、結合常數以及解離常數等參數，研究結果表明通過SPR技術能夠明顯得檢測到Ara h1與其人血清中的特異抗體IgE與IgG的結合信號，將Ara h1固定在感測器晶片上，檢測多個已知濃度的相應抗體，由結合信號與相應濃度繪製標準曲線，可以通過檢測患者血清中與Ara h1的結合信號強度對花生過敏疾病進行診斷，在分子水平上探討花生主要過敏原的致敏機理以及臨床過敏性疾病診斷的原理。同時，我們模擬胃腸道消化研究了胃蛋白酶與胰蛋白酶對花生免疫反應性的影響，初步了解了消化酶對花生總蛋白的消化特性，同時研究了消化酶對花生過敏原免疫反應性的影響，為製造生產低致敏花生產品提供理論依據。我們綜合運用圓二色光譜、螢光光譜、酶聯免疫吸附等實驗對花生過敏原蛋白的酶水解反應、高溫熱變性以及糖基化反應的導致蛋白結構變化和免疫反應性影響進行了系統的研究，初步構建了一種研究Ara h1美拉德反應的光譜學方法，並為進一步研究美拉得反應過程對蛋白結構與功能的影響提供了理論依據，對開展低致敏花生研究奠定了基礎。