《腫瘤抗原OVA12調控p53蛋白表達的生物學功能和作用機制》是依託山東大學，由張仁峰擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：腫瘤抗原OVA12調控p53蛋白表達的生物學功能和作用機制
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：張仁峰
- 依託單位：山東大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
尋找新的腫瘤抗原基因和表達蛋白，明確其生物學功能和作用機制是發展腫瘤靶向治療的關鍵。腫瘤抗原OVA12是套用重組cDNA表達文庫血清學分析技術篩選得到的一個新的蛋白分子，分子量為12KD。申請人在以往研究中證實腫瘤抗原OVA12在腫瘤細胞（組織）中特徵性高表達，具有促進腫瘤細胞增殖的重要生物學功能。套用基因晶片等高通量技術尋找OVA12作用靶點，發現OVA12能負向調控抑癌基因p53表達，但OVA12是否會影響p53蛋白轉錄活性、是否調控突變型p53蛋白表達及調控p53蛋白表達機制等問題尚未解決。因此，本項目選取p53野生型和突變型細胞株，構建OVA12高表達和干擾細胞系，研究OVA12負向調控p53蛋白的生物學功能，並通過免疫共沉澱及蛋白晶片等技術探討OVA12調控p53蛋白的作用機制。本項目研究具有重要的理論價值和良好的套用前景，能夠為研發新的抗腫瘤靶向藥物提供研究思路和作用靶點。
結題摘要
發現新的腫瘤抗原基因，結合分子生物學、蛋白組學技術明確其生物學功能，在揭示其作用機制基礎上，由基礎免疫研究向臨床腫瘤診療實踐不斷延伸，不僅具有重要理論價值，而且能為發現新的腫瘤檢測標誌物、研發新的腫瘤疫苗和腫瘤免疫治療藥物提供新的的理論依據和研究靶點。近三年來，申請人在國家自然科學青年基金項目的資助下，對腫瘤抗原OVA12促進腫瘤細胞增殖的作用機制展開初步研究。套用Real-time PCR、Western blot、免疫螢光及免疫組化技術進行檢測，結果顯示腫瘤抗原OVA12能夠負向調控p53蛋白的表達。為明確腫瘤抗原OVA12負向調控p53蛋白表達的作用機制，套用免疫共沉澱方法檢測OVA12高表達和干擾細胞系在蛋白酶體抑制劑MG132處理後p53蛋白泛素化水平。結果顯示，與對照組相比，OVA12表達降低後，p53蛋白泛素化水平明顯降低，而在OVA12高表達後，p53蛋白泛素化水平顯著提高。套用真核生物蛋白合成抑制劑放線菌酮處理OVA12高表達和干擾細胞系，套用Western blot技術檢測p53蛋白在不同時間點的表達水平，結果顯示與對照組相比，OVA12干擾後p53半衰期由40min延長至70min左右，而OVA12高表達後p53半衰期由60min減少至30min左右。為進一步明確腫瘤抗原OVA12調控p53蛋白泛素化降解的詳細作用機制，套用Real-time PCR及Western blot技術檢測結果表明OVA12不影響MDM2 mRNA及蛋白的表達水平；免疫共沉澱結果顯示OVA12與MDM2無相互作用。套用免疫共沉澱技術結合蛋白電泳及質譜技術，結果顯示，與對照組相比，發現OVA12高表達組出現四條特異性條帶；分別為breakpoint cluster region protein 1, p53, UBE2R2及 myosin light chain3。其中UBE2R2屬於泛素－蛋白酶體系統中E2泛素偶聯酶家族，為一種重要的泛素偶聯酶。因此，根據質譜結果，我們推測腫瘤抗原OVA12可能為一種新的泛素連線酶，與泛素偶聯酶UBE2R2相互作用，共同調控p53蛋白在泛素－蛋白酶體的降解過程。
