《腫瘤-睪丸抗原55與p53相互作用在腸癌發生中的分子機制》是依託湖南師範大學，由張慧慧擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：腫瘤-睪丸抗原55與p53相互作用在腸癌發生中的分子機制
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：張慧慧
- 依託單位：湖南師範大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
腸癌(CRC)是常見的消化系統惡性腫瘤之一，且發病率處於逐年上升的趨勢，目前CRC的發病機理尚未完全明確。腫瘤-睪丸抗原作為腫瘤標誌物或治療靶標，是腫瘤診斷和免疫治療的研究前沿，迄今大部分腫瘤-睪丸抗原與腫瘤發生機制的關係還不明確。我們在前期工作中發現，腫瘤-睪丸抗原55（CT55）是一個新的與p53發生相互作用的蛋白。進一步實驗證明，敲除CT55的CRC細胞增殖受抑制，我們還發現CT55可以激活DNA損傷信號通路並誘導p53蛋白表達。因此，我們提出假說在腸癌發生中，CT55與p53發生相互作用並調控p53的功能，進而在CRC細胞的增殖、侵襲和轉移中發揮作用。本項目擬明確CT55與p53相互作用在腸癌發生中的分子機制，豐富CRC相關分子生物學基礎，為CRC免疫治療的研究提供新的靶標。
結題摘要
結直腸癌是臨床常見的惡性腫瘤之一，發病率和死亡率占消化道系統惡性腫瘤的首位。其發病機制複雜，是多因素、多步驟、內外因互動作用的結果。明確其發病機制，尋找有效的治療靶標是亟待解決的問題。睪丸腫瘤抗原（CT抗原）在包括結直腸癌在內的多種腫瘤的免疫治療中發揮重要作用。CT55作為潛在的CT抗原，研究報導其在結直腸癌中高表達，但是功能和作用機制尚不明確。我們通過免疫印跡檢測12對結直腸癌及癌旁組織，證明CT55在結直腸癌組織中高表達。利用CRISPR-CAS9技術構建了Ct55敲除小鼠，用AOM/DSS誘導野生型及Ct55敲除小鼠構建腸炎誘導結直腸癌模型，Ct55敲除小鼠腸組織腫瘤數量、體積顯著減小,直腸脫垂程度減輕。Ct55敲除小鼠腫瘤組織切片蘇木素伊紅染色結果顯示炎症細胞減少，免疫組化結果顯示腫瘤細胞增殖減弱。實時螢光定量PCR顯示炎症相關因子NF-α、IL6、COX2、Ccl2，增殖/遷移相關因子PCNA、cyclinD1在Ct55敲除小鼠中表達水平有顯著降低。HCT116 CT55敲除細胞RNA-seq結果顯示CT55與NF-κB信號通路關係密切，採用免疫印跡、免疫共沉澱、螢光素酶報告基因、免疫螢光共定位實驗等方法證明CT55能夠與NF-κB信號通路中關鍵蛋白IKK複合物相互作用，並能夠促進下游關鍵蛋白IκBα的磷酸化，促進p65入核激活下游靶基因的轉錄。IKK抑制劑能夠阻斷CT55對IκBα的磷酸化以及對p65入核的影響。這些數據表明，CT55通過調控NF-κB信號通路參與結直腸癌的發生，提示CT55可能是結直腸癌治療的潛在靶標。
