《腫瘤來源的內源性蛋白類TLR4配體的捕獲與鑑定》是依託中山大學，由陳尚武擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：腫瘤來源的內源性蛋白類TLR4配體的捕獲與鑑定
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：陳尚武
- 依託單位：中山大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
Toll樣受體 (TLR)主要表達於免疫及上皮細胞，識別病原相關分子模式，中介機體對各種病原微生物的免疫學反應。某些腫瘤細胞也表達TLR，激活其TLR信號促進腫瘤細胞的生長和免疫逃逸。然而，大多數腫瘤細胞並不直接接觸微生物或其組分，那么啟動這些細胞TLR信號的調節因子是什麼？是否存在腫瘤來源的特異性TLR配體? 我們前期研究發現某些腫瘤細胞培養上清可激活TLR4，可能存在腫瘤來源的內源性TLR4調節因子，而且這種調節因子對熱敏感，提示可能為蛋白質。本課題在前期研究的基礎上，通過重組表達TLR4 及其輔助分子作釣餌，採用蛋白質組學研究新方法- - 配體垂釣技術捕獲並鑑定可能來源於腫瘤的蛋白多肽類TLR4配體，證明其對TLR4信號通路的激活效應。研究對闡明腫瘤細胞TLR表達及其信號在腫瘤發生髮展中的作用，指導腫瘤防治具有重要意義，同時可初步從生化水平上提供內源性配體與TLR直接相互作用的證據。
結題摘要
課題首先按照研究計畫採用Biacore T100生物大分子相互作用分析儀捕獲來源於腫瘤的TLR4蛋白多肽類配體。將真核表達的重組人TLR4-MD2複合物通過氨基偶聯到生物大分子相互作用分析儀BIAcore T100晶片表面為釣餌，將人肝癌細胞HepG2及正常肝細胞L02，以及卵巢癌OVCAR-3，子宮頸鱗癌細胞SiHa等腫瘤細胞，採用無血清處理誘導細胞凋亡壞死，製備可能存在內源性配體的腫瘤細胞培養上清。將腫瘤細胞培養上清加到偶聯了TLR4-MD2複合物的晶片表面，通過晶片表面固定的TLR4-MD2複合物從溶液中俘獲可能來源於腫瘤細胞的TLR4配體。結果發現，外源性TLR4配體LPS能很好地與偶聯在晶片表面的受體結合，但多種腫瘤細胞培養上清均未檢測到與受體的結合，上清濃縮後仍無明顯結合存在。同時我們開展了腫瘤相關的內源性TLR4配體HMGB1的研究。套用免疫細胞化學的方法在婦科脫落細胞學樣品製備的細胞塊上檢測HMGB1的表達，分析檢測HMGB1在宮頸癌前病變及宮頸癌診斷及鑑別診斷中的意義。 結果表明HMGB1在宮頸上皮內瘤變（CINs）和宮頸癌(ISCCs)中的檢出率逐漸增高，表明通過製備婦科脫落細胞學樣品細胞塊檢測HMGB1表達對輔助診斷CINs和ISCCs有幫助， HMGB1有可能作為一個潛在的標記分子用於宮頸上皮損傷的診斷和鑑別診斷（論文Diagnostic Cytopathology已修稿）。另外，結合本課題組對TLR4與子宮頸癌的研究，總結了TLR信號在腫瘤發生和發展中的作用，討論了外源性或內源性TLR配體，誰在腫瘤發生中發揮更重要作用(Cell Mol Life Sci. 2012;69: 935-49)，指出TLR在腫瘤中的作用具有雙面性(Biochim Biophys Acta. 2013;1835:144-54).
