脊髓白細胞可套用SYBRgreenⅠ實時螢光定量方法具有特異性強、靈敏度高、重複性好、定量準確、速度快、全封閉反應等優點,非常適合於對表達低水平Ⅰ型白細胞介素1受體mRNA的組織進行定量分析.
基本介紹
- 中文名：脊髓白細胞
- 外文名：Spinal cord leukocytes
脊髓白細胞,脊髓白細胞參考資料,
脊髓白細胞
建立一種方便可靠的方法定量檢測大鼠脊髓Ⅰ型白細胞介素1受體mRNA.方法：實驗於2004-09/2005-01在南通大學基因診斷實驗室和上海第二醫科大學神經生物學實驗室完成.雌性SD大鼠15隻.隨機分為5組,正常對照組3隻,脊髓損傷4h組3隻,脊髓損傷4h假手術組3隻,脊髓損傷24h組3隻,脊髓損傷24h假手術組3隻.利用LightcCycler螢光定量聚合酶鏈反應儀和螢光染料SYBRgreenⅠ對聚合酶鏈反應條件進行最佳化後,對用重物墜落誘導的脊髓損傷模型大鼠的脊髓組織中Ⅰ型白細胞介素1受體mRNA進行實時螢光聚合酶鏈反應,通過標準曲線法進行絕對定量分析或通過比較Ct（△△Ct）法進行相對定量分析.結果：15隻大鼠均進入結果分析.①聚合酶鏈反應特異性：熔點曲線分析和瓊脂糖凝膠電泳表明每個聚合酶鏈反應都獲得了特異性的擴增產物.②聚合酶鏈反應擴增線形與效率：該方法能夠檢測到最低100個拷貝的模板,對含有1000或更多拷貝模板的常規檢測可獲得較好的定量數據.Ⅰ型白細胞介素1受體和次黃嘌呤磷酸核糖基轉移酶的擴增效率分別是0.962,0.973.③定量計算公式的有效性：以cDNA稀釋倍數對數值為X軸,以相應目的基因和看家基因的△Ct為Y軸得到直線的斜率為0.084,可以套用公式2-△△Ct.④初步套用：脊髓損傷4h,24h後其Ⅰ型白細胞介素1受體mRNA表達水平分別有2.6倍（P<0.05）和7.8倍的增加（P<0.01）.結論：套用SYBRgreenⅠ實時螢光定量方法具有特異性強、靈敏度高、重複性好、定量準確、速度快、全封閉反應等優點,非常適合於對表達低水平Ⅰ型白細胞介素1受體mRNA的組織進行定量分析.
脊髓白細胞參考資料
http://all.zcom.com/mag2/yixue/linchuangyixue/20510/200541/1207891/
