陽離子脂質體表面帶正電荷，能與核酸的磷酸根通過靜電作用，將分子包裹入內，形成脂-複合體，也能被表面帶負電荷的細胞膜吸附，再通過融合或細胞內吞作用偶爾也通過滲透作用，將傳遞進入細胞形成包涵體或進入溶酶體。
脂質體介導法具有很多優點：製備工藝簡便，可運載大小不同的基因片段和質粒，還可運載染色體或細胞核，其內容量大大超過其他載體可抵禦核酸酶的作用，延緩基因降解。
基本介紹
- 中文名：脂質體介導法
- 外文名：Liposome mediated method
- 脂質體：脂質雙分子層
- 作用：靜電作用
- 電荷：正電荷
- 優點：製備工藝簡便
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脂質體
脂質體也稱人工細胞膜，是由脂質雙分子層組成的，磷脂分子在水中可自動生成閉合的雙層膜，從而形成一種囊狀物被稱為脂質小體，最初人們只是運用脂質體模擬膜的構造及其功能，從而發現了膜的融合及內吞作用。脂質體用於基因載體始於70年代末期，通常是將基因包裹在脂質體內並轉移至受體細胞獲得表達。
國內外對脂質體已有不少研究，但面臨一個共同的問題，就是一般不易獲得理想的轉染效率。目前，許多研究者把提高轉染效率作為研發有套用前景的脂質體的重要指標之一，對如何提高脂質體轉染效率進行了大量研究。
脂質體介導法
陽離子脂質體表面帶正電荷，能與核酸的磷酸根通過靜電作用，將分子包裹入內，形成脂一複合體，也能被表面帶負電荷的細胞膜吸附，再通過融合或細胞內吞作用偶爾也通過滲透作用，將傳遞進入細胞形成包涵體或進入溶酶體。
脂質體介導法的原理
脂質體介導法的原理是首先雙層膜的封閉式陽離子脂質體試劑加入水中時形成微小的單層脂質體（大小約為100-400nm），由於脂質體帶正電，可以通過靜電作用結合到DNA磷酸骨架上以及帶負電的細胞膜表面，形成DNA-陽離子脂質體複合物；其次DNA-陽離子脂質體複合物通過某種機制進入細胞內，被俘獲的DNA就會被導入培養的細胞中，在細胞內分解並釋放出DNA；最後核酸進入細胞核並在相應位點整合，使轉染基因得以表達。DNA-陽離子脂質體複合物進入細胞的途徑目前認為主要有三種：直接與細胞質膜融合；通過細胞內吞作用進入細胞；與細胞質膜進行脂質交換。諸多研究表明，膜融合與內吞作用同時存在，細胞內吞作用實際上是主要機制。
脂質體介導法的優點
脂質體介導法具有很多優點：製備工藝簡便，可運載大小不同的基因片段和質粒，還可運載染色體或細胞核，其內容量大大超過其他載體可抵禦核酸酶的作用，延緩基因降解。脂質體與細胞融合後，重組基因導入細胞，脂質體即被降解，磷脂可被細胞生物膜利用。操作簡便，轉化效率比較高，可以用於瞬時轉染，也可以用在永久表達系的建立，對細胞類型的運用面廣，對轉染的核酸類型和分子量有很高的包容性，細胞毒性小，也可以用於體內的基因轉染。因此脂質體轉染法得到了越來越廣泛的套用。
脂質體介導法的最佳化
陽離子脂質體在基因轉染時有很多不確定性，受到諸多因素影響，如不同細胞及時間，不同結構及比率等。本實驗中以含pEGFP報告基因的pEGFP-N1質粒作為靶DNA，套用Bio-rad公司的Silentfectlipid脂質體轉染原代培養的人瘢痕疙瘩成纖維細胞，探討血清、DNA劑量、脂質體濃度、轉染時間對轉染效率的影響，從而找到脂質體介導法轉染原代培養的人瘢痕疙瘩成纖維細胞的最優條件。
