脂肪幹細胞用於治療顳下頜關節骨關節炎的實驗研究

《脂肪幹細胞用於治療顳下頜關節骨關節炎的實驗研究》是依託吉林大學，由吳國民擔任項目負責人的青年科學基金項目。

基本介紹

• 中文名：脂肪幹細胞用於治療顳下頜關節骨關節炎的實驗研究
• 項目類別：青年科學基金項目
• 項目負責人：吳國民
• 依託單位：吉林大學

項目摘要

目的：闡明ASCs用於治療TMJOA的治療效果、套用規律及相關細胞分子的作用機制。意義：為ASCs用於治療TMJOA積累科學的數據,為ASCs治療TMJOA的最終臨床套用作好基礎研究工作。方法：擬採用細胞生物學和分子生物學誘導分化的方法完成ASCs分離、培養和鑑定，作為體內外實驗的種子細胞；建立TMJOA的動物模型，套用不同濃度的ASCs注射於損傷的關節內，並通過影像學、分子生物學、組織學、組織形態計量學、生物力學等手段評價ASCs對TMJOA的治療效果；體外培養髁突的軟骨細胞，套用不同濃度的ASCs進行聯合培養，套用細胞生物學和分子生物學方法評價ASCs對髁突軟骨細胞生物學行為的影響及細胞旁分泌因子表達的變化；設立BMSCs治療的陽性對照組，生理鹽水治療的陰性對照組和健康TMJ的空白對照組；實驗所得數據套用SPSS13.0軟體進行統計學分析。預期結果：闡明顳下頜關節骨關節炎的發病機理，並為利用脂肪幹細胞矯治顳下頜關節骨關節炎提供科學的實驗依據。

結題摘要

目的：探討顳下頜關節骨關節病中軟骨下骨的改建及機制，探討脂肪幹細胞用於治療顳下頜關節骨關節病的可能性。 方法：採用關節腔注射膠原酶法建立顳下頜關節骨關節的動物模型，按膠原酶注射後的時間分組。製作顳下頜關節組織學標本，做組織病理學染色、相關蛋白的免疫組織化學檢測、軟骨下骨中幹細胞相關蛋白的Western blot分析。通過Image-Pro Plus圖像分析軟體定量檢測相關蛋白在軟骨下骨的表達變化，使用SPSS軟體對檢測結果進行統計學分析。自動物體內獲取脂肪組織，分離、培養和鑑定ASCs。用手術損傷關節盤的方法建立TMJOA的動物模型，再套用ASCs做關節腔內注射，組織學觀察療效。 結果：組織學染色：實驗組軟骨纖維層連續性破壞，軟骨層次紊亂，骨軟骨交界不清晰，出現OA樣變化，軟骨下骨骨小梁形態和密度均出現明顯改變，在軟骨下骨區內出現了軟骨樣化生。相關蛋白的免疫組織化學染色：在OA早期（2周時），CD44和MMP-9蛋白的表達明顯升高(P＜0.01)，隨時間增加表達強度逐漸減弱；在OA的疾病過程中，Sox-9和Col Ⅱ蛋白的表達均有升高，組間差異不明顯。軟骨下骨中幹細胞相關蛋白表達的Western blot分析：各實驗組中，CD44和Sox-9蛋白含量均明顯增加，隨時間延長CD44蛋白含量呈逐漸下降趨勢，Sox-9表達比較平穩。統計學分析： 實驗組中Col Ⅱ、MMP-9、CD44和Sox-9蛋白表達與正常對照組比較均有明顯升高（P＜0.05）；實驗組中軟骨下骨CD44和Sox-9蛋白表達明顯升高（P＜0.05），CD44 蛋白表達各組間差異明顯（P＜0.05），在OA早期（2周時）CD44 蛋白表達顯著增加（P＜0.01）。成功分離、培養和鑑定了脂肪幹細胞。 結論： 1.關節腔內注射膠原酶和手術損傷關節盤的方法建立穩定、可重複的TMJOA動物疾病模型。 2.在TMJOA的進程中，軟骨下骨對關節軟骨的早期修復起了重要的作用。 3．在TMJOA的進程中，軟骨下骨的內源性幹細胞或前體細胞對骨組織改建和軟骨損傷的修復起了重要的作用。 4. ASCs具有多向分化的潛能，關節腔內注射ASCs對TMJOA療效明顯，ASCs可以成為TMJOA修復的種子細胞。