胺基酸等電點

isoeletric point ，pI 定義：

2、胺基酸淨電荷為零時的pH值。

3、胺基酸是兩性電解質，在鹼性溶液中表現出帶負電荷，在酸性溶液中表現出帶正電荷，在某一定pH溶液中，胺基酸所帶的正電荷和負電荷相等時的pH,稱為該胺基酸的等電點。

pI的計算公式：

1、對於側鏈R基不解離得中性胺基酸來說，pI=1/2（pK_a1+PK_a2）。

2、對於有多個解離基團的胺基酸來說，只要寫出它的解離公式，然後取等電兼性離子兩邊的pK_a的平均值則得出其pI值。

註：pI值與該離子濃度基本無關，只取決於等電中性離子A⁰兩側的pK值。

胺基酸的濃度測定

1、胺基酸的甲醛滴定（formal titration）

原理

胺基酸雖然是一種兩性電解質，即是酸性又是鹼性，但它卻不能直接用酸鹼滴定來進行測量。這是因為胺基酸的酸鹼滴定的等電點pH過高（12-13）或是過低（1-2）沒有適合的指示劑可備選用。而向胺基酸中加入過量的甲醛，用氫氧化鈉滴定時，由於甲醛可與胺基酸上的—N⁺H₃結合，形成—NH—CH₂OH、—N(CH₂—OH)₂等羥甲基衍生物，而降低了胺基酸的鹼性，相對增強了—N⁺H₃的解離，使滴定終點移到了pH9附近，在酚酞指示劑的變色區域內，能夠用酚酞作為指示劑進行滴定。

以上出自《生物化學》（高等教育出版社 2006.5，王鏡岩等主編）

流程

甲醛滴定法測定胺基酸含量

目的

初步掌握甲醛滴定法測定胺基酸含量的原理和操作要點

原理

水溶液中的胺基酸為兼性離子，因而不能直接用鹼滴定胺基酸的羧基。甲醛可與胺基酸上的—N⁺H₃結合，形成—NH—CH₂OH、—N(CH₂—OH)₂ 等羥甲基衍生物，使N⁺H₃上的H⁺游離出來，這樣就可以用鹼滴定N⁺H₃放出H⁺，測出氨基氮，從而計算胺基酸的含量。

若樣品中只含有單一的已知胺基酸，則可由此法滴定的結果算出胺基酸的含量。若樣品中含有多種胺基酸（如蛋白質水解液），測不能由此法算出胺基酸的含量。

脯氨酸與甲醛作用後，生成的化合物不穩定，導致滴定後結果偏低；酪氨酸含酚基結構，導致滴定結果偏高。

材料、試劑與器具

（一）試劑

1、0.5%酚酞酒精溶液

稱0.5g酚酞溶於100ml60%酒精中。

2、0.05%溴麝香草酚藍溶液

取0.05溴麝行草酚藍溶於100ml 20%乙醇溶液中。

3、1%甘氨酸溶液

取1g甘氨酸溶於100ml蒸餾水。

4、標準0.100mol/L 氫氧化鈉溶液

5、中性甲本醛溶液

取甲醛溶液50ml，加0.5%酚酞指示劑約3ml，滴加0.1mol/LnaOH溶液，使溶液呈微粉紅色，臨用前中和。

錐形瓶編號試劑	樣品1	樣品2	空白
1%甘氨酸溶液或樣品（ml）	2.0	2.0	—
蒸餾水（ml）	5.0	5.0	7.0
中性甲醛溶液（ml）	5.0	5.0	5.0
0.05%溴麝香草酚藍溶液（滴）	2	2	2
0.5%酚酞乙醇溶液（滴）	4	4	4

胺基酸等電點

基本介紹