《肺鱗癌轉移相關蛋白DJ-1促腫瘤轉移的分子機制研究》是依託中南大學，由李萃擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：肺鱗癌轉移相關蛋白DJ-1促腫瘤轉移的分子機制研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：李萃
- 依託單位：中南大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
DJ-1是一種與多種腫瘤相關的瘤基因，在腫瘤的發生髮展中發揮著重要的作用。我們的研究不僅發現DJ-1在肺鱗癌淋巴結轉移灶中的表達水平較其原發灶明顯增高，而且還證實DJ-1在無轉移的肺鱗癌組織中的表達較正常支氣管上皮組織中增高，但是低於有轉移的肺鱗癌原發灶，這強烈提示DJ-1與肺鱗癌的轉移密切相關。但DJ-1究竟是通過何種機制促進肺鱗癌轉移仍不明確。因此本項目擬在前期研究的基礎上一方面系統分析DJ-1的表達水平改變對肺鱗癌惡性生物學特徵，特別是對侵襲轉移的影響，並尋找DJ-1蛋白與肺鱗癌臨床特徵之間的關係以闡明DJ-1在肺鱗癌轉移中扮演的角色。另一方面通過以串聯親和純化耦聯質譜技術為主的靶向蛋白質組學技術分離、鑑定肺鱗癌細胞中DJ-1 蛋白的相互作用蛋白，發現DJ-1與其相互作用蛋白作用時動態分子網路的改變特徵，從而闡明DJ-1的促肺鱗癌轉移的分子機理，為肺鱗癌轉移的防治研究提供新線索。
結題摘要
DJ-1是一種與多種腫瘤相關的瘤基因，為研究DJ-1基因與肺癌發生髮展關係，我們採用RNAi技術穩定干擾SK-MES-1（肺鱗癌細胞株）、HTB-182(肺鱗癌細胞株)、HBE(正常支氣管上皮細胞)細胞系中DJ-1的表達建立穩定剔除DJ-1基因的細胞系，採用MTT、平板克隆形成試驗、流式細胞分析技術、劃痕實驗、Transwell侵襲與遷移實驗等對其進行生物學特性的分析。製作組織晶片，套用免疫組化檢測DJ-1分別在正常支氣管上皮組織（20例）、無轉移的肺鱗癌組織（30例）、有轉移的肺鱗癌原發灶組織及其轉移灶的肺鱗癌組織中（30例）、其他類型肺癌組織（20例）的表達情況，並分析DJ-1蛋白與肺鱗癌臨床特徵之間的關係。構建帶有TAP標籤的DJ-1質粒，穩定轉染肺鱗癌細胞繫上調DJ-1的表達，採用串聯親和純化耦聯質譜技術為主的靶向蛋白質組學技術分離、CO-IP鑑定肺鱗癌細胞中DJ-1 蛋白的相互作用蛋白。結果如下：在穩定剔除DJ-1基因的細胞系中，DJ-1 siRNA 干擾組中DJ-1蛋白表達明顯低於Control-siRNA組和空白對照組；MTT法結果顯示干擾組的細胞增殖速度明顯抑制；平板克隆實驗結果顯示干擾組細胞增殖能力降低；流式細胞術結果顯示干擾組G1期和G2期細胞數比例增高，S期細胞比例減少；Tanswell小室遷移實驗結果顯示干擾組的遷移能力降低（P＜0.05）。這些結果提示DJ-1具有促進腫瘤生成和轉移、抑制凋亡的作用。免疫組化法結果顯示DJ-1在無轉移的肺鱗癌組織、有轉移的肺鱗癌組織以及其他類型肺癌組織中的表達分別與正常支氣管上皮組織中的表達相比均明顯增高，而它在有轉移的肺鱗癌組織的表達也明顯高於無轉移的肺鱗癌組織，這表明DJ-1不僅與肺癌的癌變相關，而且在肺鱗癌的轉移中發揮著重要的作用。構建帶TAP標籤質粒，採用脂質體穩定轉染細胞株HTB-182、Park7-RNAi-HTB-182、SK-MES-1、Park7-RNAi-SK-MES-1，挑選陽性克隆進行DJ-1相互作用蛋白的篩選。採用串聯親和純化耦聯質譜技術為主的靶向蛋白質組學技術分離鑑定肺鱗癌細胞中DJ-1 蛋白的相互作用蛋白，此實驗進行了二次預實驗，尚未得到理想結果，實驗還在進行中。
