肝癌幹細胞microRNA特異性表達譜及其靶基因篩查驗證研究

《肝癌幹細胞microRNA特異性表達譜及其靶基因篩查驗證研究》是依託中山大學，由姜楠擔任項目負責人的青年科學基金項目。

基本介紹

• 中文名：肝癌幹細胞microRNA特異性表達譜及其靶基因篩查驗證研究
• 項目類別：青年科學基金項目
• 項目負責人：姜楠
• 依託單位：中山大學

中文摘要

肝切除術後肝癌復發轉移缺少有效早期診斷及治療方法是目前影響肝癌療效的主要原因，建立肝癌診斷治療新方法是提高肝癌患者長期存活率的關鍵。我們前期在部分肝癌細胞株和原代肝癌標本中分離出高度懷疑為肝癌幹細胞的細胞群，本研究擬利用肝癌幹細胞表面標誌物，對肝癌細胞株及肝癌組織中的肝癌幹細胞進行分離，利用microRNA 晶片技術對肝癌幹細胞miRNAs進行高通量的譜系分析得到候選miRNAs，對其進行體外、體內功能驗證，進一步篩查特異性肝癌幹細胞miRNAs，結合生物信息學技術對肝癌幹細胞miRNAs的靶基因進行預測和驗證，同時在正常肝細胞、肝硬化組織、肝癌患者血清、肝癌組織及常見腫瘤中的表達進行驗證，篩選出和肝癌幹細胞高度相關的候選基因和治療新靶點，為肝癌的復發和轉移建立基因水平上的早期診斷及預後判斷指標。

結題摘要

肝切除術後肝癌復發轉移缺少有效早期診斷及治療方法是目前影響肝癌療效的主要原因，建立肝癌診斷治療新方法是提高肝癌患者長期存活率的關鍵。目前認為腫瘤可能起源於腫瘤幹細胞，雖然尚無公認的肝癌幹細胞表面標記，但是腫瘤幹細胞在腫瘤的發生髮展、轉移復發及預後中起著重要的作用已達成共識。本項目先後在多種肝癌細胞株（Bel-7402、SMMC-7721、MHCC97h 、Huh7 及 PLC/PRF/5）中利用側群細胞分離、CD133標誌物及無血清培養基分離富集肝癌幹細胞等不同方法對肝癌幹細胞進行了分選驗證研究，通過克隆形成實驗、Transwell實驗及裸鼠成瘤實驗證實肝癌幹細胞具有更強的侵襲能力和體內成瘤能力，通過這些研究建立了多種分選肝癌幹細胞的方法，為今後深入研究肝癌幹細胞提供技術平台；進一步利用microRNA晶片技術對體外培養肝癌細胞株和其對應的肝癌幹細胞分別進行miRNA表達譜進行檢測研究，經過分析初步篩選得出60多個差異表達的microRNA，有望成為針對肝癌幹細胞的治療新靶點，並對miR-184在肝癌發生髮展中的作用進行了深入研究，結果發現miR-184可促進肝癌細胞在體外的增值和腫瘤的形成，miR-184促進肝癌細胞增值和腫瘤發生是通過抑制內源性SOX7的表達實現的；通過分析109例肝癌肝移植病例的臨床資料，發現幹細胞表面標誌物CD133與肝癌肝移植預後有關，是影響肝癌肝移植患者術後生存率的獨立危險因素，以上研究有助於為肝癌術後的復發和轉移建立分子水平上的早期診斷及預後判斷指標提理論依據。