《胰腺癌侵襲轉移特異性microRNA的篩選及其靶基因的鑑定》是依託復旦大學，由紀元擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：胰腺癌侵襲轉移特異性microRNA的篩選及其靶基因的鑑定
- 依託單位：復旦大學
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：紀元
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
2008年胰腺癌位居癌症致死原因的第4位，高侵襲性和高轉移性是治療失敗的主要原因。本組發現不同癌前病變來源導管癌侵襲轉移性不同，microRNA表達有明顯差異。推測microRNA與胰腺癌侵襲轉移密切相關。microRNA微陣列晶片初篩，實時RT-PCR比對有無轉移的導管癌中microRNA的表達量，確定與轉移相關的候選miR217。原位雜交分析其細胞內分布及與癌前病變的關係。通過敲低或過表達，確定其對胰腺癌細胞株侵襲轉移能力的影響，在裸鼠體內促進胰腺癌遠處轉移的作用。根據預測軟體的交集探尋可能的靶基因MAPK1，螢光素酶表達載體鑑定靶位點，RT-PCR定量分析MAPK1mRNA表達量，Western blot確定MAPK1蛋白表達量，免疫組化鑑定靶蛋白，確定miR217調控的MAPK1與轉移相關性。探尋胰腺癌侵襲轉移特異性microRNA及對其靶基因的闡釋將為胰腺癌的診治提供新靶點新方法
結題摘要
本課題的前期研究發現不同癌前病變來源導管癌侵襲轉移性不同，microRNA表達有明顯差異。推測microRNA與胰腺癌侵襲轉移密切相關。microRNA微陣列晶片初篩出miR31與miR217為備選，定量RT-PCR研究發現在有淋巴結轉移的胰腺導管癌,無淋巴結轉移的IPMN起源導管癌及周圍正常胰腺組織中分別定量分析miR-217,發現三組間存在顯著性差異。miR217在導管內乳頭狀腫瘤（IPMN）中的表達也隨上皮細胞的異型程度而改變,但始終高於導管腺癌的表達水平。正常胰腺組織的表達明顯高於前二者。確定與轉移相關的候選miRNA為miR217。經過原位雜交分析，發現其細胞內分布於細胞核，與癌前病變的關係密切。在癌前病變導管上皮內瘤變（PanIN）2~3 中 miR217 表達降低，導管腺癌表達消失，且比周圍正常胰腺組織差異最明顯。在新鮮胰腺腫瘤標本中，通過冰凍切片檢查與顯微切割方法，分離IPMN, PanIN及DAC 細胞，確定在癌前病變PanIN3中miR217 表達降低。 基於實驗驗證的miR-217的靶基因,我們分析之後認為KRAS、NR4A2和IRS 1是三個比較可信的靶基因候選。其中KRAS已被證明和胰腺癌的調控相關,而IRS1是和腫瘤的產生相關的。將miR-217靶基因預測的結果和上述基因表達譜差異分析的結果結合起來,從而找到在IPMN和導管癌中最可能的受miR-217調控的靶基因IRS1。 在進行mir217靶向調節靶基因IRS1功能鑑定中，擴增靶基因IRS1全長3′UTR序列或部分序列,構建到psiCHECHK 2載體上。根據生物信息學預測的mir217和靶基因IRS1的 3′UTR的結合序列信息,構建突變載體psiCHECHK鑑定靶位點。 RT-PCR定量分析IRS1mRNA表達量，發現表達量與淋巴結轉移相關，高表達組淋巴結轉移增多，低表達組淋巴結轉移少。免疫組化鑑定IRS1蛋白定位於細胞漿及細胞膜，在有淋巴結轉移的胰腺癌原發灶中瀰漫強表達於癌細胞漿，在癌前病變PanIN中灶性表達於異型上皮細胞胞漿或胞膜。在IPMN中灶性表達於胞膜,並隨上皮的異型程度增加而增強。由此確定miR217調控的IRS1與胰腺癌轉移密切相關。探尋胰腺癌侵襲轉移特異性microRNA217及對其靶基因IRS1的闡釋將為胰腺癌的診治提供新靶點新方法.
