原理,試劑,儀器和設備,取樣,試樣製備,分析步驟,皂化,提取,分析試樣溶液的製備,測定,平行試驗,空白實驗,計算,精密度,
原理
試樣經皂化後，用石油醚提取不皂化的維生素E，濃縮後，用高效液相色譜儀測定，用外標芝笑民慨法計算樣品中維生素E的含量。
試劑
除特別標明外，所用試劑均為分析純。
（1）水：符合GB/T 6682-2008規定的一級水。
（2）無水乙醇。
（3）石油醚：沸程30～60℃。
（4）無水硫酸鈉。
（5）異丙醇。
（6）甲醇：色譜純或重蒸後使用。
（7）氫氧化鉀溶液（500g/L）:稱取50g氫氧化鉀，溶於水中，用水稀釋至100mL。
（9）α-生育酚標準物質：DL-α-生育酚或DL-α-生育酚醋酸酯。
（10）α-生育酚標準溶液
①標準貯備液（1000ug/mL）
若標準物質為α-生育酚，則稱取50.0mg，用異丙醇溶解，定容於50mL棕色容量瓶中。4℃保存。
臨用前用紫外分光光度計按“標準溶液的標定”標定其濃度。
若標準物質為α-生育酚的酯類物質，則稱取50.0mg，按“分析步驟”進行皂化、提取、濃縮，用異丙醇溶解，定容於50mL棕色容量瓶中。4℃保存。
②標準工作液
用異丙醇將已標定濃度的標準貯備液稀釋成所需的標準工作液。
臨用前配製。
③標準溶液的標定
移取α-生育酚標準貯備液100uL於5mL具塞試管中，用無水乙醇稀釋至3mL，于波長294nm處用紫外分光光度計測定α-生育酚的吸光度值。
按下式計算α-生育酚標準貯備液的濃度：
c1：α-生育酚標準貯備液的墓充棄濃度，g/mL;
A：α-生育酚的紫外吸收值；
Ecm：α-生育酚的1%比吸光係數，即溶液濃度為1%、光路員組腳蘭為1cm時的吸收係數，值為71；
V1：移取α-生育酚標準貯備液的體積，uL。
儀器和設備
實驗室常規儀器及下列儀器。
（1）機械設備：用於試樣的均質化，包括高速旋轉的切割機，或多孔板的孔徑不超過4mm的絞肉機。
（2）旋轉蒸發儀。
（3）液相色譜儀：帶紫外或螢光檢測器。嘗埋
（4）紫外分光光度計。
取樣
實驗室所收到的樣品應具有代表性且在運輸和儲藏過程中無受損或發生變化。
取樣方法參見GB∕T 9695.19。
取有代表性的樣品200 g。
試樣製備
使用適當的機械設備將試樣均質。注意避免試樣的溫度超過25℃。若使用絞肉機，試樣至少通過該設備兩次。
將試樣裝入密封的容器里，防止變質和成分變化。試樣應在均質化後24 h內儘快分析。
分析步驟
註：維生素E易被氧化,實驗應避光或充氮操作,並使用棕色玻璃儀器。
皂化
稱取0.5～5g（準確至0.001g）試樣於150mL燒瓶中，加入抗壞血酸溶液3mL，氫氧化鉀溶液5mL，無水乙醇30mL，混勻，於沸水浴上回流15～30min，使試樣溶液清澈，皂化後於流水中冷卻。
提取
將皂化後的試樣溶液移入125mL分液漏斗中，用30mL石油醚分數次洗皂化瓶，洗液併入分液漏斗中，塞上塞子，輕搖分液漏斗，避免乳化。靜置，待分層後，將水層放入第二個分液漏斗中，醚層留在第一個分液漏斗中，於第二個分液漏斗中倒入10mL石油醚，進行第二次提取，如此進行3～4次，石油醚層併入第一個分液漏斗中。
分析試樣溶液的製備
將盛有石油醚提取液的圓底燒瓶與旋轉蒸發器連線，於40～60℃水浴上減壓蒸餾石油醚，待瓶內只剩約1～2mL液體時，取下燒瓶，用氮氣吹乾剩餘液體，立即加入2.0mL異丙醇，塞上塞子,以防溶劑揮發。此為色譜分析用樣液。
測定
液相色譜參考條件
色譜柱：C18柱（150mm×4.6mm，5μm），或相當者；
流動相：甲醇；
流速：1.0mL/min；
柱溫：30℃；
檢驗器章堡嚷：紫外檢測器：波長292nm；螢光檢測器，激發波長為298nm，發射波長為325nm；
進擇量：20μL。
標準曲線的繪製
將α-生育酚系列標準工作液進行高效液相色譜分析，記錄峰面積或峰高，以α-生育酚的濃度為橫坐標，以相應的峰高或峰面積為縱坐標繪製標準曲線。
註：α-生育酚應能與β-生育酚、γ-生育酚和δ-生育酚分離
試樣溶液的測定
將製備好的試樣溶液按標準工作液的液相色譜條件進行測定。根據試樣溶液市享影的峰面積或峰高，從標準曲線上查出對應α-生育酚的濃度。
平行試驗
按“分析步驟”，對同一試樣進行平行試驗測定。
空白實驗
除不加入試樣外，均按“分析步驟”進行測定。
計算
X：試樣中α-生育酚的含量，mg/100g；
c2：根據試樣的峰面積或峰高查標準曲線得到的α-生育酚的濃度，μg/mL；
V2：試樣液最終定容的體積，mL；
m：試樣質量，g。
計算結果應扣除空白，結果準確至0.01mg/100g。
精密度
同一分析者在同一實驗室採用相同的方法和相同的儀器，在短時間間隔內對同一樣品獨立測定兩次，兩次測試結果的絕對差值不得超過算數平均值的30%。
分析步驟
註：維生素E易被氧化,實驗應避光或充氮操作,並使用棕色玻璃儀器。
皂化
稱取0.5～5g（準確至0.001g）試樣於150mL燒瓶中，加入抗壞血酸溶液3mL，氫氧化鉀溶液5mL，無水乙醇30mL，混勻，於沸水浴上回流15～30min，使試樣溶液清澈，皂化後於流水中冷卻。
提取
將皂化後的試樣溶液移入125mL分液漏斗中，用30mL石油醚分數次洗皂化瓶，洗液併入分液漏斗中，塞上塞子，輕搖分液漏斗，避免乳化。靜置，待分層後，將水層放入第二個分液漏斗中，醚層留在第一個分液漏斗中，於第二個分液漏斗中倒入10mL石油醚，進行第二次提取，如此進行3～4次，石油醚層併入第一個分液漏斗中。
分析試樣溶液的製備
將盛有石油醚提取液的圓底燒瓶與旋轉蒸發器連線，於40～60℃水浴上減壓蒸餾石油醚，待瓶內只剩約1～2mL液體時，取下燒瓶，用氮氣吹乾剩餘液體，立即加入2.0mL異丙醇，塞上塞子,以防溶劑揮發。此為色譜分析用樣液。
測定
液相色譜參考條件
色譜柱：C18柱（150mm×4.6mm，5μm），或相當者；
流動相：甲醇；
流速：1.0mL/min；
柱溫：30℃；
檢驗器：紫外檢測器：波長292nm；螢光檢測器，激發波長為298nm，發射波長為325nm；
進擇量：20μL。
標準曲線的繪製
將α-生育酚系列標準工作液進行高效液相色譜分析，記錄峰面積或峰高，以α-生育酚的濃度為橫坐標，以相應的峰高或峰面積為縱坐標繪製標準曲線。
註：α-生育酚應能與β-生育酚、γ-生育酚和δ-生育酚分離
試樣溶液的測定
將製備好的試樣溶液按標準工作液的液相色譜條件進行測定。根據試樣溶液的峰面積或峰高，從標準曲線上查出對應α-生育酚的濃度。
平行試驗
按“分析步驟”，對同一試樣進行平行試驗測定。
空白實驗
除不加入試樣外，均按“分析步驟”進行測定。
計算
X：試樣中α-生育酚的含量，mg/100g；
c2：根據試樣的峰面積或峰高查標準曲線得到的α-生育酚的濃度，μg/mL；
V2：試樣液最終定容的體積，mL；
m：試樣質量，g。
計算結果應扣除空白，結果準確至0.01mg/100g。
精密度
同一分析者在同一實驗室採用相同的方法和相同的儀器，在短時間間隔內對同一樣品獨立測定兩次，兩次測試結果的絕對差值不得超過算數平均值的30%。
