基本介紹
- 中文名：肉與肉製品 維生素PP含量測定
- 外文名：Meat and Meat Products-Determination of Vitamin PP Content
試劑和材料,儀器與設備,取樣,試樣製備,分析步驟,提取,中和,測定,標準曲線的繪製,計算,
原理
維生素PP經氫氧化鈣溶液提取，與溴化氰結合，在對氨基苯乙酮作用下，生成黃色化合物，在420mm波長處測定吸光度，標準曲線法定量。
試劑和材料
如無特別說明，所有世紀均為分析純。
（1）水：符合GB/T 6682-2008規定的三級水。
（2）乙醇。
（3）戊醇。
（4）鹽酸溶液（6mol/L）：量取25mL鹽酸（ρ20≈1。19g/mL），用水稀釋至50mL。
（5）硫酸溶液（5mol/L）：量取13。5mL鹽酸（ρ20≈1。84g/mL），用水稀釋至50mL。
（6）硫酸溶液（1 mol/L）：量取13。5mL鹽酸（ρ20≈1。84g/mL），用水稀釋至50mL。
（7）氫氧化鈣溶液（1 mol/L）：稱取3。7g氫氧化鈣，用水溶解並稀釋至50mL。
（8）硫酸鋅飽和溶液：稱取12g硫酸鋅，在室溫下用水溶解並稀釋至20mL，如有沉澱需過濾。
（9）氫氧化鈉溶液(3 mol/L)：稱取6g氫氧化鈉，用水溶解並稀釋至50mL。
（10）氫氧化鈉溶液(1mol/L)：稱取2g氫氧化鈉，用水溶解並稀釋至50mL。
（11）10%溴化氰溶液：稱取2g溴化氰，用水溶解並稀釋至20mL。
註：溴化氰是劇毒試劑，應戴上手套在通風櫥里配製。
（12）2%對氨基苯乙酮溶液：稱取對氨基苯乙酮1g，用少量鹽酸溶解，用水稀釋至50mL。
（13）酚酞指示劑（10g/mL）：稱取0。5g酚酞，用乙醇溶解並稀釋至50mL。
（14）煙酸標準儲備液（1mg/mL）：稱取已乾燥恆重並貯存於五氧化二磷乾燥器中的煙酸標準品0。1g（準確至0。001g），用5mol/L硫酸1mL溶解，轉移至100mL容量瓶中，定容。在℃冰櫃內保存。
（15）煙酸標準工作液：吸取煙酸標準儲備液0。25mL、0。50mL、1。00mL、2。00mL、2。50mL，分別置於100mL容量瓶中，用水定容，混勻。此標準工作液系列中煙酸的濃度分別為2。5ug/mL、5ug/mL、10ug/mL、20ug/mL、25ug/mL。
儀器與設備
實驗室常規儀器及下列儀器。
（1）機械設備：用於試樣的均質化，包括高速旋轉的切割機，或多孔板的孔徑不超過4mm的絞肉機。
（2）恆溫水浴。
（3）分光光度計。
（4）分析天平：可準確稱重至±0。001g。
取樣
實驗室所收到的樣品應具有代表性且在運輸和儲藏過程中無受損或發生變化。
取樣方法參見GB∕T 9695.19。
取有代表性的樣品200 g。
試樣製備
使用適當的機械設備將試樣均質。注意避免試樣的溫度超過25℃。若使用絞肉機，試樣至少通過該設備兩次。
將試樣裝入密封的容器里，防止變質和成分變化。試樣應在均質化後24 h內儘快分析。
分析步驟
提取
稱取試樣2g(精確到0。001g)於三角瓶中，加1mol/L氫氧化鈣溶液10mL，水40mL，混勻後，在沸水浴上提取90min，冷卻後移入100mL（V1）容量瓶中，定容。混勻過濾，濾液備用。
中和
吸取濾液25。00mL（V2）於50mL（V3）容量瓶中，加酚酞指示劑兩滴，用6mol/L鹽酸中和至紅色剛剛退去。加入飽和硫酸鋅溶液2mL及幾滴戊醇，用3mol/L和1mol/L氫氧化鈉溶液調至粉紅色。滴加1 mol/L硫酸溶液，使粉紅色剛好褪去，用水定容，混勻，放置10 min後過濾，濾液備用。
測定
分別吸取煙酸標準工作液1。00mL（V4）於具塞試管中，加水4 mL，吸取試樣液5。00mL（V5）於具塞試管中。於上述各試管中加入10%溴化氰溶液2 mL搖勻。置60～70℃水浴中保溫15min後，迅速冷卻。加入2%對氨基苯乙酮溶液1 mL，搖勻，在暗處放置15min。在420nm波長處測定吸光度。
標準曲線的繪製
以標準工作液的濃度為橫坐標，相應的吸光值為縱坐標繪製標準曲線。
計算
試樣中維生素PP的含量按下式計算：
X——試樣中維生素PP含量，mg/kg；
c——從標準曲線上查得待測試樣溶液中維生素PP的濃度，ug/mL；
V3——試樣溶液第二次定容的體積，mL；
V1——試樣溶液第一次定容的體積，mL；
V4——顯色用標準工作液的體積，mL；
m——試樣質量，g；
V2——中和用試樣溶液的體積，mL；
V5——顯色用試樣溶液的體積，mL；
結果保留至小數點後一位。
