《翻譯後修飾CREB-1阻斷TGF-β1介導的實驗性肝纖維化》是依託華中科技大學，由徐可樹擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：翻譯後修飾CREB-1阻斷TGF-β1介導的實驗性肝纖維化
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：徐可樹
- 依託單位：華中科技大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
我們前期研究證實轉化生長因子-β3（TGF-β3）能有效抑制TGF-β1介導的肝纖維化，進一步研究發現cAMP反應序列結合蛋白-1（CREB-1）是TGF-β3信號通路中的關鍵調節蛋白，能抑制肝星狀細胞（HSC）中Ⅰ型膠原的產生，提示其有抗肝纖維化能力。國外最新研究也顯示磷酸化的CREB-1在抗心肌纖維化和肺纖維化中起促進作用，但磷酸化的CREB-1極易失活，翻譯後修飾能使蛋白的空間構象發生改變並可最大程度的發揮其生物學效應，翻譯後修飾的CREB-1在肝纖維化中的作用尚不十分清楚。本課題以CREB-1作為切入點，擬構建CREB-1慢病毒載體並穩定感染肝纖維化模型大鼠和HSC以誘導CREB-1蛋白的大量表達，通過特異的磷酸化酶和乙醯化酶定向修飾CREB-1，證實翻譯後修飾的CREB-1在阻斷TGF-β1介導的肝纖維化中起重要作用，為闡明CREB-1的抗肝纖維化機制提供理論依據。
結題摘要
我們前期研究證實轉化生長因子-β3（TGF-β3）能有效抑制TGF-β1介導的肝纖維化，而cAMP反應序列結合蛋白-1（CREB-1）是TGF-β3信號通路中的關鍵調節蛋白，而CREB-1在肝纖維化中的作用尚不清楚。本項目的主要研究內容是探討翻譯後修飾的CREB-1對TGF-β1信號通路和其介導的肝纖維化的影響。在實驗中，我們用pRSV-CREB-1質粒上調CREB-1表達，分別用cAMP激動劑(FSK)或組蛋白去乙醯化酶抑制劑TSA刺激CREB-1磷酸化和乙醯化，結果表明活化的CREB-1可以降低TGF-β1介導的I型膠原、磷酸化Smad2/Smad3、磷酸化 Erk1/2、RhoA、ROCK1的表達，並能增加Smad7的表達。因此，翻譯後修飾的CREB-1不僅可以通過Smad依賴途徑還可以通過Smad非依賴途徑抑制TGF-β1介導的肝纖維化。在CCl4誘導的大鼠肝纖維化模型中，發現肝纖維化時p-CREB-1的表達水平較對照組明顯升高 (1.8-fold, P＜0.01)，提示p-CREB-1可能在肝纖維化形成中發揮重要作用。此外，使用外源性重組蛋白TGF-β1處理HSC，結果顯示外源性TGF-β1誘導HSC 內p-CREB-1的表達，而內源性TGF-β1 和collagen I 的mRNA和蛋白的表達也增加。在HSC內，上調或下調CREB-1的表達水平，使用外源性TGF-β1處理或不處理，結果顯示在p-CREB-1表達上調的HSC內，TGF-β1 和collagen I的表達也增加，當合併TGF-β1誘導時增加更為顯著。相反，在p-CREB-1表達下調的HSC內，TGF-β1 和collagen I的表達降低，外源性TGF-β1對內源性TGF-β1 和collagen I表達的誘導作用也減弱。此外，我們還通過染色質免疫共沉澱和報告基因的方法，發現p-CREB-1作為一種順式作用元件，能夠結合到TGF-β1基因啟動子中的CRE位點上，啟動TGF-β1基因的轉錄。在肝纖維化大鼠模型中，通過尾靜脈注射慢病毒以上調CREB-1的表達，發現TGF-β1 和collagen I表達增多和纖維化形成。本項目深入研究了翻譯後修飾的CREB-1在TGF-β1介導的肝纖維化中的重要作用和作用機制，豐富了肝纖維化發生機制和抗纖維化治療靶點的理論研究。
