缺損突變體

缺損突變體是生物基因突變。

基本介紹

  • 中文名:缺損突變體
  • 外文名:HBV
  • 類型:基因突變
  • 領域:生物
簡介,結果,結論,

簡介

HBV作為基因治療載體的可能性及檢驗HBV點突變表達顯性陰性突變體抗HBV的作用。方法在表達完整HBV顆粒的質粒上,經基因修飾後分別表達核心-P蛋白及核心-表面抗原的融合蛋白,整合於具有HBV複製的2.2.15細胞,形成細胞克隆,ELISA法檢測細胞培養上清液中HBsAg和HBeAg,斑點雜交法檢測細胞內HBV核殼中HBVDNA,PCR檢測上清液中重組HBV顆粒。結果2.2.15-pMEP4組、2.2.15-CP組、2.2.15-CS組,對HBsAg平均抑制率分別為2.74%±3.83%.40.08%±2.05%(P<0.01)和52.94%±1.93%(P<0.01);對HBeAg平均抑制率分別為4.46%±4.25%、52.86%±1.32%(P<0.01)和41.60%±1.65%(P<0.01);對HBV複製的抑制率分別為15.3%、82.0%和67.2%。僅在2.2.15-CP組培養上清液中能檢測出突變型HBV顆粒。結論在細胞內表達顯性陰性突變體具有干擾HBV複製及抑制HBV抗原表達的作用;經修飾後的HBV基因組在野生型HBV輔助下.仍能包裝並分泌完整的HBV樣顆粒。
在表達完整HBV顆粒的質粒上,經基因修飾後分別表達兩種類型顯性陰性突變體,整合於具有HBV複製的2.2.15細胞,形成細胞克隆,ELISA法檢測細胞培養上清液中HBsAg和HBeAg,斑點雜交法檢測細胞內HBV核殼中HBVDNA,PCR檢測上清液中重組HBV顆粒。

結果

2.2.15-pMEP4組、2.2.15-CP組、2.2.15-CS組,對HBsAg平均抑制率分別為2.74±3.83%、40.08±2.05%(P<0.01)和52.94±1.93%(P<0.01);對HBeAg平均抑制率分別為4.46±4.25%、52.86±1.32%(P<0.01)和41.60±1.65%(P<0.01);對HBV複製的抑制率分別為15.3%、82.0%和67.2%。僅有2.2.15-CP組培養上清液中能檢測出突變型HBV顆粒。

結論

經過對HBV基因組的改造,在細胞內表達顯性陰性突變體具有干擾HBV複製及抑制HBV抗原表達的作用;在2.2.15細胞中野生型HBV輔助下,仍能包裝成完整的HBV樣顆粒並分泌到細胞外,未來臨床套用有望實現放大效應。

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