《縫隙連線網路作為腦血管痙攣共同通路的機制研究》是依託南昌大學，由洪濤擔任項目負責人的專項基金項目。
基本介紹
- 中文名：縫隙連線網路作為腦血管痙攣共同通路的機制研究
- 項目類別：專項基金項目
- 項目負責人：洪濤
- 依託單位：南昌大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
腦血管痙攣是蛛網膜下腔出血後常見而又嚴重的併發症，其機制未明，無特效治療方法，是神經科學領域的世界性難題。我們創新地開展了縫隙連線在腦血管痙攣中作用的研究，大量前期結果證實：1.腦血管壁存在廣泛的縫隙連線網路；2.該網路參與了腦血管痙攣的形成；3.在腦血管痙攣中，多因素通過不同細胞內外信號轉導途徑調節縫隙連線功能，套用縫隙連線阻斷劑均能緩解多因素引起的腦血管痙攣。本課題圍繞多因素引起的腦血管痙攣最終均有縫隙連線網路參與的現象，提出了縫隙連線網路可能是腦血管痙攣病理過程中的“共同通路”。本課題擬繼續深入研究多因素調節縫隙連線功能的分子機制、胞內離子濃度及電壓變化調節縫隙連線功能的機制，以及縫隙連線在腦血管痙攣中對不同電化學信號的選擇性傳輸。在探明以上機制的基礎上，尋找有臨床套用潛能的治療靶點，為將來篩選有效防治腦血管痙攣的藥物奠定基礎。
結題摘要
腦血管痙攣是蛛網膜下腔出血後常見而又嚴重的併發症，我們創新地開展了縫隙連線在腦血管痙攣中作用的研究，本課題深入研究多因素調節縫隙連線功能的分子機制、胞內離子濃度調節縫隙連線功能的機制，以及縫隙連線在腦血管痙攣中對不同電化學信號的選擇性傳輸。研究內容包括：1、Cx43/43、Cx43/Cx40、Cx40/Cx40三種縫隙連線通道中給予血管活性物質刺激，套用Western Blot技術檢測縫隙連線蛋白Cx43、Cx40的磷酸化水平，並套用質譜技術研究通過細胞內各種磷酸激酶途徑及調節GJ蛋白磷酸化的確切磷酸化位點。2、血管活性物質作用後檢測縫隙連線通道對染料的通透性變化，觀察Cx43、Cx40磷酸化後三種通道信息傳輸功能的改變。3、套用相應的激動劑或抑制劑在原代培養的基底動脈平滑肌細胞上，加入血管活性物質，觀察平滑肌細胞舒縮功能的影響。本研究得出如下結果：1、三種縫隙連線通道中給予ET-1刺激後，Cx43、Cx40的磷酸化水平升高，Cx40的磷酸化水平升高更明顯。2、通過質譜技術鑑定出Cx43的4個磷酸化位點，Cx43 S368位點磷酸化水平明顯升高，磷酸化信號PKC途徑可能為Cx43 S368位點的主要磷酸化途徑。3、分別檢測出Cx43/43、Cx43/Cx40、Cx40/Cx40三種縫隙連線通道的信號傳輸功能及ET-1刺激Cx43、Cx40磷酸化後通過Cx43/43、Cx43/Cx40、Cx40/Cx40三種縫隙連線通道的信號傳輸功能的變化：Cx43/43縫隙連線通道被ET-1刺激後對染料的通透性明顯下降，Cx40/40縫隙連線通道被ET-1刺激後對染料的通透性增高不如Cx43/43縫隙連線通道明顯，Cx43/40縫隙連線通道被ET-1刺激後對染料的通透性變化不大。未被ET-1刺激的Cx43/43、Cx43/Cx40、Cx40/Cx40三種縫隙連線通道對於染料的通透性，Cx43/43＞Cx43/Cx40＞Cx40/Cx40。以上結果揭示，縫隙連線磷酸化是其參與腦血管痙攣的重要病理形式，不同縫隙連線蛋白磷酸化的改變影響了縫隙連線通道的信號傳輸功能，磷酸化降低了其相關縫隙連線通道的通透性；Cx43相關縫隙連線通道對於染料的通透性大於Cx40相關縫隙連線通道。
