《糖尿病視網膜病變AGE-修飾蛋白的差異蛋白質組學研究》是依託蘭州大學，由劉靖芳擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：糖尿病視網膜病變AGE-修飾蛋白的差異蛋白質組學研究
- 依託單位：蘭州大學
- 項目負責人：劉靖芳
- 項目類別：面上項目
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
蛋白質糖基化是一種重要的翻譯後修飾，異常的糖基化常會導致人類疾病的發生髮展。本項目通過鏈脲佐菌素誘導建立糖尿病早期視網膜病變（DR）大鼠模型；1-DE、2-DE和Western Blot分離大鼠血清和視網膜組織中的糖基化終末產物（AGE）-修飾蛋白；Quantity-one、Progenesis Samespots分析早期DR大鼠血清和視網膜組織中差異表達的AGE-修飾蛋白；基質輔助雷射解吸電離飛行時間質譜（MALDI-TOF-MS）鑑定被AGE修飾的蛋白質；NetNGlyc預測AGE-修飾蛋白N-端的糖基化位點，分析糖基化對蛋白質的結構和功能所產生的影響。另外，胰島素強化治療早期DR大鼠4周，觀察大鼠視網膜組織微血管的形態、超微結構、血清和視網膜組織中AGE-修飾蛋白糖基化程度的改變。本研究將全面揭示蛋白質的非酶糖基化在DR患者發病中的作用，為DR患者的早期診斷和治療找到新的生物標誌物。
結題摘要
糖基化是蛋白質翻譯後重要的修飾方式之一，對細胞的正常生長起著重要的調節作用，直接或間接地影響著蛋白質的生物學功能。蛋白質的異常糖基化常會導致人類疾病的發生髮展，如糖尿病(DM)、衰老和神經元退行性病變等。高血糖情況下蛋白質的非酶糖基化增加，所形成的AGE-修飾蛋白在組織中的靶向聚集，與DM終末器官的損害，特別是與糖尿病視網膜病變(DR)、糖尿病腎病和糖尿病周圍神經病變等微血管病變的發生髮展密切相關。 本研究中選擇成年雄性SD 大鼠90隻，隨機分為正常對照組（n=30）和DM 組（n=60）。DM 組按60ｍg/kg 腹腔注射1%STZ１次，正常對照組則注射等量枸櫞酸鈉-枸櫞酸三鈉緩衝液。連續3 天測定隨機血糖，DM 組大鼠若血≥16mmol/L，即算造膜成功。成模後，DM 大鼠再分為：DM 病程1 月組（n=30）、DM 病程3 月組（n=30）。2 組分別在成膜後1 個月、3 個月處死大鼠，迅速取出眼球，在解剖顯微鏡下分離視網膜組織，進行HE 染色、透射電鏡超微結構觀察。其它視網膜組織液氮速凍，提取總蛋白，-80 ℃保存。結果顯示光鏡下隨著隨著DM病程的增加，DM大鼠毛細血管染色不均，官腔閉塞，基底膜增厚。電鏡下隨著DM病程增加，毛細血管內皮細胞腫脹，視網膜微絨毛增多，毛細血管基底膜增厚。ELIS定量分析顯示DM大鼠血清和視網膜組織中AGE-修飾蛋白的濃度顯著高於正常對照組。1-DE/Western blot分離3組大鼠血清和視網膜組織中的AGE-修飾蛋白，2-DE/Western blot分離3組大鼠血清和視網膜組織中的AGE-修飾蛋白，以Quantity-one和Progenesis Samespots軟體分析早期大鼠血清和視網膜組織中AGE-修飾蛋白的表達，目前表達分析和蛋白鑑定正在進一步分析當中。
