《磁性納米粒子增強自噬小體DC疫苗抗腫瘤及機制研究》是依託南京大學，由牟永斌擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：磁性納米粒子增強自噬小體DC疫苗抗腫瘤及機制研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：牟永斌
- 依託單位：南京大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
以腫瘤抗原負載樹突狀細胞（DC）回輸惡性腫瘤患者體內為代表的腫瘤生物治療作為一種新型腫瘤治療模式具有高效、低細胞毒性和低副作用等特點已廣受關注。抗原的類型和多寡在負載DC時極為關鍵，直接影響免疫應答的強度。我們利用腫瘤細胞自噬過程中蛋白質降解途徑所產生的富含各種代謝蛋白的納米級顆粒自噬小體作為抗原疫苗，發現其能有效啟動免疫反應，促進DC表面共刺激分子CD40表達。同時，我們利用合成的超順磁氧化鐵納米粒子能夠促進DC表達CD40的現象使其作為佐劑，輔助自噬小體的抗腫瘤作用。鑒於CD40在腫瘤免疫應答中誘導功能性T細胞的機制尚不清楚，我們將利用與自噬小體同源的CD40敲除小鼠，研究CD40在自噬小體抗腫瘤過程中與功能性T細胞的作用與機制，為該疫苗和氧化鐵納米粒子的臨床套用提供實驗依據，為臨床生物治療中檢測DC表達CD40提供理論基礎並為提高DC表面CD40表達為基礎的基因治療奠定基礎。
結題摘要
腫瘤免疫治療是新型的抗腫瘤治療手段，其目的是激發和增強機體自身免疫能力來治療腫瘤。樹突狀細胞（Dendritic cell, DCs）是機體內抗原遞呈能力最強的專職抗原提呈細胞。抗腫瘤DCs疫苗啟動抗腫瘤免疫的有效性依賴於負載的抗原形式。本研究採用MMSN負載OVA模式抗原後，驗證其MMSN的免疫佐劑功能。然後通過自噬誘導劑、蛋白酶體抑制劑、溶酶體抑制劑處理腫瘤細胞，誘導分離出特異性的自噬性抗原DRibble，驗證MMSN-DRibble的免疫原性，檢測DC負載佐劑後的功能標誌變化，及活化特異性T細胞的能力。 本研究從以下方面進行：1、通過材料學檢測，檢測MMSN的性能特點，包括MMSN的透射、掃描電鏡，粒徑分布獲得材料的形態大小，通過紅外光譜和X-線衍射證明材料的表面基團修飾。氮氣吸脫附實驗證明MMSN的介孔吸附能力。磁性測試得到材料的磁滯回線。並檢測MMSN吸附純化模式抗原OVA的能力。2、體外觀察DC吞噬MMSN-OVA。MMSN-OVA對DC的凋亡沒有顯著影響。其能顯著上調DC表面CD40、CD80、CD86和MHC-II的表達。相比與單獨的OVA，可以更好地刺激體內的特異性T細胞活化，分化成CD3+CD8+IFN-γ+ T 細胞殺傷腫瘤。3. 小鼠腫瘤細胞SCC7經自噬誘導劑、抑制蛋白酶體和溶酶體抑制劑處理24小時後，收集獲得的自噬小體，表達自噬標誌分子LC3-II和Ub。電鏡顯示DRibbles富含大量自噬體結構，直徑約200-500nm不等。具有較強刺激淋巴細胞增殖作用作用。與腫瘤細胞裂解物相比，DRibble-DCs在體外具有更強的刺激淋巴結來源T細胞和脾臟來源T細胞增殖的能力，並且DRibble濃度升高，活化DC抗原提呈的功能受到抑制可能是與DC的ERS通路激活有關。MMSN結合DRibble後負載DC作為新型DC疫苗，在體內實驗顯著提高荷瘤小鼠生存率。本研究明確了新型MMSN納米材料的特性及其在DC疫苗作為佐劑的套用。誘導分離口腔鱗癌細胞系來源DRibble並在體外證實其對淋巴細胞增殖活化的作用；並探索DRibble與DC內質網應激之間的關係；MMSN-DRibble負載DC治療荷瘤小鼠，具有比單獨DRibble更好的抗腫瘤效應。
