《石斑魚PIAS1調控病毒誘導的I型干擾素表達的分子機制》是依託華南農業大學，由魏京廣擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：石斑魚PIAS1調控病毒誘導的I型干擾素表達的分子機制
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：魏京廣
- 依託單位：華南農業大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
天然免疫是機體抵禦病毒入侵的第一道防線，但是過激的天然免疫反應會導致一些疾病的產生。因此，對於天然免疫負向調控子和負向調控機制的研究是近年來免疫學領域的熱點。PIAS蛋白是重要的負調控子，在免疫相關信號通路中發揮重要的調節作用。迄今為止，魚類中PIAS1功能報導較少。我們前期工作中成功克隆了石斑魚PIAS1基因，過量表達PIAS1可抑制病毒誘導的NF-κB，ISRE和IFN-β啟動子的激活。本項目擬在此基礎上，利用基因克隆、螢光定量PCR、免疫螢光、免疫共沉澱、免疫印跡、報告基因、點突變、基因過表達/敲降等技術，開展如下研究：（1）PIAS1表達模式、細胞定位和SUMO E3 ligases活性；（2）PIAS1調控NF-κB激活的作用機理；（3）PIAS1調控病毒誘導IRF3激活的作用機理。研究結果將為闡明魚類細胞抗病毒免疫反應的分子機制奠定一定理論基礎，也為魚類病毒病防控提供潛在的治療靶點。
結題摘要
天然免疫是機體抵禦病毒入侵的第一道防線，但是過激的天然免疫反應會導致一些疾病的產生。因此，對於天然免疫負向調控子和負向調控機制的研究是近年來免疫學領域的熱點。PIAS蛋白是重要的負調控子，在免疫相關信號通路中發揮重要的調節作用。迄今為止，魚類中PIAS1功能報導較少。我們前期工作中成功克隆了石斑魚PIAS1基因，過量表達PIAS1可抑制病毒誘導的NF-κB，ISRE和IFN-β啟動子的激活。本項目在此基礎上，利用基因克隆、螢光定量PCR、免疫螢光、免疫共沉澱、免疫印跡、報告基因、點突變、基因過表達/敲降等技術，成功鑑定了石斑魚 PIAS1 SUMO E3 ligases 活性，完成了石斑魚 PIAS1調控NF-κB和IRF3激活的作用機理，闡明了PIAS1 調控病毒誘導I型干擾素產生的分子機制。（1）石斑魚PIAS1可以促進自身的SUMO化修飾，並且RLD結構域是其SUMO E3 ligases活性所必需的。（2）石斑魚PIAS1不僅在轉錄因子水平上調控 NF-κB 通路，也可以結合TLR通路的中間接頭分子並參與調控。石斑魚PIAS1可以結合MyD88並促進MyD88依賴的 NF-κB 通路的激活，還可以結合TRAF6，並作為 SUMO E3 連線酶來促進TRAF6 的SUMO化修飾，促進了TRAF6引起的NF-κB通路的激活。（3）石斑魚PIAS1參與調控IRF信號通路，並且對IRF家族成員的調控機制存在著差異。PIAS1可以抑制IRF1和7誘導的ISRE啟動子活性，而激活了其他IRF啟動子活性。PIAS1可以和IRF1、2、4、6、8、9、10 共定位，不能和IRF3、5和7共定位。Co-IP進一步檢測發現石斑魚PIAS1與石斑魚IRF3和7可以相互作用。石斑魚PIAS1可以調節IRF3的SUMO化和泛素化修飾。研究結果將為闡明魚類細胞抗病毒免疫反應的分子機制奠定一定理論基礎，也為魚類病毒病防控提供潛在的治療靶點。
