白細胞抗原（HLA）是人體有核細胞共有也是最強的同種抗原，其受控於主要組織相容複合物（MHC）的基因簇，該簇位於人第六號染色體的短臂上，根據受控的基因位點不同，HLA抗原共分為Ⅰ類、Ⅱ類和Ⅲ類。Ⅰ類抗原包括HLA-A、HLA-B、HLA-C；Ⅱ類抗原包括HLA-DR、HLA-DQ、HLA-DP位點；Ⅲ類抗原為C4a、C4b、C2、Bf等。
基本介紹
- 中文名：白細胞抗原分型
- 臨床意義：個體識別、親子鑑定
分型方法,臨床意義,
分型方法
1.血清學分型方法
淋巴細胞膜上存在HLA抗原，用已知的抗體與淋巴細胞混合、孕育，通過抗原抗體免疫反應而獲得未知的HLA抗原信息。HLA細胞毒抗體屬於lgG和IgM類型的免疫球蛋白，在補體存在的情況下，該抗體能夠結合到帶有相應抗原的活化的淋巴細胞膜上，並在膜上打孔；若淋巴細胞不帶有相應的抗原，就不會起作用。死細胞通過染色，染料通過破裂的細胞膜進入細胞而使其著色，活細胞不被著色，通過評估死細胞占全部細胞的百分比，可以反映抗原、抗體反應的強度。
2.HLA細胞學分型方法
HLA-D座位上的抗原稱之為LD抗原，採用細胞學分型方法檢測。常用檢測方法有三種：混合淋巴細胞培養（MLC）技術；純合細胞分型技術；預處理淋巴細胞分型方法。MLC又可分單向MLC和雙向MLC。
（1）單向MLC：刺激細胞不再增殖，未處理的應答細胞能夠識別外來刺激細胞的HLA-D抗原，發生增殖。測量用同位素3H標記的胸腺嘧啶核苷被結合的情況，判定受檢細胞的HLA型別。
（2）雙向MLC：直接把不同遺傳型且未經處理的兩個個體的淋巴細胞混合培養，兩方HLA-D抗原互不相容，相互刺激導致細胞被活化並產生增殖。兩類淋巴細胞都有刺激能力和反應能力。
3.分子生物學分型方法
在序列特異性引物（SSP）存在的條件下，用已知的一段DNA與從細胞核提取的DNA混合，通過PCR擴增技術可獲得序列特異性寡核苷酸（SSO）。目前HLA-DNA分型均以PCR技術為基礎，主要包括：聚合酶鏈反應寡核苷酸探針雜交（PCR/SSO）、順序特異引物聚合酶鏈反應技術（PCR/SSP）、限制性片段長度多態性聚合酶鏈反應（PCR/RFLP）、聚合酶鏈反應單鏈構象多態性（PCR/SSCP）、基於序列的HLA分型法（SBT）等，最常用的主要有三種：PCR/SSP、PCR/SSCP、PCR/SSO，此類方法可使HLA分型結果更加迅速、靈敏、精確。
（1）PCR/RFLP分型法：不同的HLA特異性等位基因之間存在一定核苷酸差異，當用相同的限制性核酸內切酶去消化這些特異性等位基因的差異位點時，會得到不同長度和不同數目的DNA片段，經電泳、溴化乙啶染色、紫外照射成像後藉助HLA分型程式或手工查表即可確定HLA基因型別。
（2）PCR/SSCP分型法：用PCR擴增特定的靶序列，經變性成為兩條單鏈，然後在不含變性劑的中性聚丙烯醯胺凝膠中電泳。DNA單鏈的遷移率取決於其長短和其形成的構象。不同的單鏈構象不同，若存在鹼基差異，會表現為電泳的遷移率不同，根據這個可將不同型的HLA區分開。
（3）PCR/SSO分型法：以位點間或組間特異性引物擴增目的基因，將其擴增產物轉移到固相支持體上，利用序列特異性核苷酸探針，通過southern雜交進行擴增片段的分析、鑑定。探針可採用放射性同位素標記或非放射性標記進行相應標記物檢測。
（4）PCR/SSP分型法：根據核苷酸鹼基序列的多態性和已知的DNA序列，設計各種具有型特異性、組特異性或等位基因特異性的引物。引物的3’-端和5’-鹼基可根據多態性序列的不同與其互補。每個型別都有特定的引物相對應。通過特定的PCR反應體系擴增各等位基因的型別特異性DNA片段，產生相對應的特異性擴增產物條帶。若為純合子，產生一條與特異引物相對應的擴增帶；若為雜合子，則產生兩條與特異引物對應的擴增帶。擴增產物僅需藉助常規的瓊脂糖凝膠電泳，即可根據是否存在特異性產物的電泳條帶直接進行HLA基因分型。此為目前臨床器官移植配型的常用方法之一。
（5）SBT分型法：用PCR擴增獲得大量DNA片段，然後採用測序方法檢測擴增片段的鹼基序列。該方法是最可靠、最徹底的基因分型方法，它不僅能進行序列識別和分型，更有助於發現新的基因型。
（6）基因晶片：將許多特定的寡核苷酸片段或基因片段作為探針，有規律地排列固定於固相載體上，然後與待測的標記過的樣本進行核酸分子雜交，通過雷射共聚焦螢光檢測系統掃描晶片，並對每一個探針上的螢光信號進行檢測，從而獲得HLA基因表達情況。
淋巴細胞膜上存在HLA抗原，用已知的抗體與淋巴細胞混合、孕育，通過抗原抗體免疫反應而獲得未知的HLA抗原信息。HLA細胞毒抗體屬於lgG和IgM類型的免疫球蛋白，在補體存在的情況下，該抗體能夠結合到帶有相應抗原的活化的淋巴細胞膜上，並在膜上打孔；若淋巴細胞不帶有相應的抗原，就不會起作用。死細胞通過染色，染料通過破裂的細胞膜進入細胞而使其著色，活細胞不被著色，通過評估死細胞占全部細胞的百分比，可以反映抗原、抗體反應的強度。
2.HLA細胞學分型方法
HLA-D座位上的抗原稱之為LD抗原，採用細胞學分型方法檢測。常用檢測方法有三種：混合淋巴細胞培養（MLC）技術；純合細胞分型技術；預處理淋巴細胞分型方法。MLC又可分單向MLC和雙向MLC。
（1）單向MLC：刺激細胞不再增殖，未處理的應答細胞能夠識別外來刺激細胞的HLA-D抗原，發生增殖。測量用同位素3H標記的胸腺嘧啶核苷被結合的情況，判定受檢細胞的HLA型別。
（2）雙向MLC：直接把不同遺傳型且未經處理的兩個個體的淋巴細胞混合培養，兩方HLA-D抗原互不相容，相互刺激導致細胞被活化並產生增殖。兩類淋巴細胞都有刺激能力和反應能力。
3.分子生物學分型方法
在序列特異性引物（SSP）存在的條件下，用已知的一段DNA與從細胞核提取的DNA混合，通過PCR擴增技術可獲得序列特異性寡核苷酸（SSO）。目前HLA-DNA分型均以PCR技術為基礎，主要包括：聚合酶鏈反應寡核苷酸探針雜交（PCR/SSO）、順序特異引物聚合酶鏈反應技術（PCR/SSP）、限制性片段長度多態性聚合酶鏈反應（PCR/RFLP）、聚合酶鏈反應單鏈構象多態性（PCR/SSCP）、基於序列的HLA分型法（SBT）等，最常用的主要有三種：PCR/SSP、PCR/SSCP、PCR/SSO，此類方法可使HLA分型結果更加迅速、靈敏、精確。
（1）PCR/RFLP分型法：不同的HLA特異性等位基因之間存在一定核苷酸差異，當用相同的限制性核酸內切酶去消化這些特異性等位基因的差異位點時，會得到不同長度和不同數目的DNA片段，經電泳、溴化乙啶染色、紫外照射成像後藉助HLA分型程式或手工查表即可確定HLA基因型別。
（2）PCR/SSCP分型法：用PCR擴增特定的靶序列，經變性成為兩條單鏈，然後在不含變性劑的中性聚丙烯醯胺凝膠中電泳。DNA單鏈的遷移率取決於其長短和其形成的構象。不同的單鏈構象不同，若存在鹼基差異，會表現為電泳的遷移率不同，根據這個可將不同型的HLA區分開。
（3）PCR/SSO分型法：以位點間或組間特異性引物擴增目的基因，將其擴增產物轉移到固相支持體上，利用序列特異性核苷酸探針，通過southern雜交進行擴增片段的分析、鑑定。探針可採用放射性同位素標記或非放射性標記進行相應標記物檢測。
（4）PCR/SSP分型法：根據核苷酸鹼基序列的多態性和已知的DNA序列，設計各種具有型特異性、組特異性或等位基因特異性的引物。引物的3’-端和5’-鹼基可根據多態性序列的不同與其互補。每個型別都有特定的引物相對應。通過特定的PCR反應體系擴增各等位基因的型別特異性DNA片段，產生相對應的特異性擴增產物條帶。若為純合子，產生一條與特異引物相對應的擴增帶；若為雜合子，則產生兩條與特異引物對應的擴增帶。擴增產物僅需藉助常規的瓊脂糖凝膠電泳，即可根據是否存在特異性產物的電泳條帶直接進行HLA基因分型。此為目前臨床器官移植配型的常用方法之一。
（5）SBT分型法：用PCR擴增獲得大量DNA片段，然後採用測序方法檢測擴增片段的鹼基序列。該方法是最可靠、最徹底的基因分型方法，它不僅能進行序列識別和分型，更有助於發現新的基因型。
（6）基因晶片：將許多特定的寡核苷酸片段或基因片段作為探針，有規律地排列固定於固相載體上，然後與待測的標記過的樣本進行核酸分子雜交，通過雷射共聚焦螢光檢測系統掃描晶片，並對每一個探針上的螢光信號進行檢測，從而獲得HLA基因表達情況。
臨床意義
1. HLA是誘導移植排斥反應的主要抗原。不同種族、不同個體的人類白細胞抗原千差萬別，必須採用一定的方法對捐獻者和患者的人類白細胞抗原分型進行確定，從而選擇與患者人類白細胞抗原相匹配的捐獻者進行移植。
2. HLA基因型或表現型的檢測，已成為法醫學上的個體識別和親子鑑定的重要手段。
2. HLA基因型或表現型的檢測，已成為法醫學上的個體識別和親子鑑定的重要手段。
