《癌/睪丸抗原HCA587對腫瘤細胞周期的調控作用及其機制研究》是依託北京大學，由尹艷慧擔任負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：癌/睪丸抗原HCA587對腫瘤細胞周期的調控作用及其機制研究
- 項目負責人：尹艷慧
- 依託單位：北京大學
- 項目類別：面上項目
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
HCA587是我室利用SEREX方法篩選得到的一個新的癌/睪丸（cancer/testis）抗原，簡稱CT抗原。這種抗原在正常組織中只局限表達於睪丸，而在多種腫瘤組織中廣泛表達，被認為是作為腫瘤免疫治療的最佳候選分子。目前為止，CT抗原HCA587在腫瘤細胞中表達的生物學意義尚不清楚，我們的初步研究結果顯示，HCA587蛋白的表達可促進細胞周期進程，且其表達水平受細胞周期調控；生物信息學分析提示HCA587蛋白含有F-box結構域，是F-box蛋白家族中的一個新的成員。研究CT抗原HCA587在腫瘤細胞周期中的調控作用，探索HCA587與SCF（SKP1-CUL1-F-box蛋白）泛素連線酶複合物及周期蛋白依賴激酶抑制因子p27之間的關係，有助於揭示CT抗原HCA587在腫瘤發生、發展中的作用，為腫瘤的分子靶向治療提供新的途徑。
結題摘要
HCA587，又名MAGE-C2，是我室利用SEREX方法從原發性肝細胞癌患者的腫瘤組織cDNA文庫中篩選到的一個新的腫瘤睪丸抗原。HCA587在正常組織中特異地表達於睪丸的精原細胞與初級精母細胞，而在多種腫瘤組織廣泛表達。對HCA587生物學功能的研究將揭示其在腫瘤發生、發展過程中的作用，為腫瘤的靶向治療提供新的候選分子。我們通過生物信息學方法預測，發現HCA587的胺基酸序列組成中含有F-box結構域，提示其屬於F-box家族成員。通過建立過表達體系及RNA干擾技術，在多種細胞系中證實了HCA587對腫瘤細胞的生長具有明顯的促進作用，並通過對細胞凋亡的檢測，排除了HCA587對細胞凋亡的影響；通過分析HCA587對細胞周期進程的影響，發現HCA587的表達能明顯促進腫瘤細胞由G1期向S期的過渡。為進一步研究HCA587調控細胞周期進程的分子機制，我們檢測了HCA587與SCF複合物的關係。通過免疫共沉澱的方法證明了HCA587與SCF複合體成員Cullin1和Skp1存在相互作用，進一步通過GST pulldown實驗證實HCA587與cullin1 存在直接的相互作用，且HCA587與cullin1的結合依賴於cullin1的C區結構域(533-736),同時也證明了HCA587與SKP1並無直接相互作用；在內源性表達HCA587的黑色素瘤細胞系SK-MEL-37細胞，通過 DuolinkII系統進一步證實了Cullin1與HCA587在細胞記憶體在直接的相互作用；通過免疫共沉澱分析顯示HCA587與Cullin1的結合併不影響Cullin1與SKP1、RBX1的結合，但對SCF複合物對底物的泛素化有影響，體內泛素化研究顯示HCA587抑制SCF複合物對周期蛋白cyclin E的泛素化作用，增加了細胞內cyclin E的穩定性。我們的研究結果顯示腫瘤睪丸抗原HCA587可通過與Cullin1結合抑制SCF複合物對底物的泛素化，從而促進細胞周期的進程，促進細胞的生長。
