琥珀基半胱氨酸

抗特定位點胺基酸磷酸化蛋白質多克隆抗體及對應非磷酸化蛋白質多克隆抗體在製備疾病診斷試劑中的套用。

琥珀基半胱氨酸

多克隆抗體是指：以一端帶半胱氨酸的含有磷酸化胺基酸的多肽為半抗原，用磺基琥珀醯亞胺4-[N甲基馬來酸]-1-羧環已烷做偶聯劑與鑰孔嘁血藍蛋白連線成半抗原-載體蛋白系統，經免疫程式免疫兔子後，取血分離血清，血清經兩步抗原親和層析後純化出抗特定位點胺基酸磷酸化蛋白和抗對應非磷酸化蛋白的多克隆抗體。該多克隆抗體的製備方法是：合成多肽、用偶聯劑與鑰孔嘁血藍蛋白連線成半抗原-載體蛋白系統、經免疫程式免疫兔子後取血分離血清，經兩步抗原親和層析後純化出抗特定位點胺基酸磷酸化蛋白和抗對應非磷酸化蛋白的多克隆抗體。

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:目的通過製備S-腺苷同型半胱氨酸(SAH)-BSA偶聯物和SAH單克隆抗體(mAb)，建立同型半胱氨酸(Hcy)免疫學測定方法。方法以二磺基琥珀醯辛二酸鹽為連線劑製備SAH—BSA偶聯物；PEG細胞融合技術製備SAHmAb，間接酶聯免疫吸附試驗(ELISA)鑑定SAHmAb的特異性，以競爭ELISA測定Hcy。結果製備的SAH—BSA偶聯物的克分子比為3～5，SAHmAb與Ado、半胱氨酸、蛋氨酸等無交叉反應；但與S-腺苷蛋氨酸為0．1～0．2μmol/L時，存在交叉反應。初步建立的Hcy競爭ELISA測定區間為1～50μmol/L，回收率為98%～101%，變異係數為1%～3%。與高效液相層析法有高度相關性(r=0．9836)。結論我們製備的SAH—BSA偶聯物和SAHmAb及建立的競爭EHSA法適用於Hcy測定