《特異降解AML1-ETO的融合蛋白TAT-MLLRD-NHR2的製備與套用研究》是依託中國人民解放軍軍事科學院軍事醫學研究院，由趙興卉擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：特異降解AML1-ETO的融合蛋白TAT-MLLRD-NHR2的製備與套用研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：趙興卉
- 依託單位：中國人民解放軍軍事科學院軍事醫學研究院
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
AML1-ETO是急性髓性白血病患者中常見的癌蛋白，能夠抑制細胞分化並促進其惡性增殖。利用反義核酸、siRNA或冬凌草甲素特異地靶向AML1-ETO可以造成其mRNA下調或蛋白降解，促使白血病細胞分化或凋亡，而不影響正常血細胞的功能，因此，AML1-ETO是理想的白血病靶向治療靶標。我們在前期研究中發現蛋白結構域MLL-RD對AML1-ETO具有強烈的降解作用；本申請擬利用特異靶向識別AML1-ETO的NHR2結構域，構建融合蛋白TAT-MLLRD-NHR2，並在哺乳動物細胞表達系統中對其進行表達與純化製備。本申請還將探索該融合蛋白在體外模型（AML1-ETO陽性細胞系Kasumi-1和SKNO-1）與體內模型（注射AML1-ETO陽性細胞系的NOD/SCID小鼠）中對AML1-ETO的降解及作用。本申請將為白血病的靶向治療與AML1-ETO在白血病發生髮展中作用的機理研究提供新思路。
結題摘要
為了特異降解白血病癌蛋白AML1-ETO以實現靶向治療，本研究設計、最佳化並構建了能夠特異降解AML1-ETO的融合蛋白TAT-MLLRD-NHR2（TAT-CMN）和REV-MLLRD-NHR2（REV-CMN）。首先，將MLL-RD降解AML1-ETO的結構域由原先的一千多個胺基酸縮減至核心的約60個胺基酸（CXXC結構域，1154-1211aa）；其次，通過對比各種細胞滲透肽與EGFP的融合蛋白進入各白血病細胞系的情況，選取REV和TAT構建CMN（REV更佳）。REV-CMN與TAT-CMN連入我室高效真核表達載體，篩選到高表達CHO細胞株，並進行了小規模的擴大培養，經鎳柱、Sephadex G25分子排阻層析純化，獲得純度＞95%的足量蛋白質。REV-CMN和TAT-CMN可抑制AML1-ETO陽性的白血病細胞系生長，但並不影響AML1-ETO陰性白血病細胞系的生長。 本課題的順利開展，證明這種特異降解癌蛋白的思路可能，這種設計融合蛋白的思路還可推廣用於特異降解諸如TEL-AML1和CBF-SMMHC等其他白血病相關癌蛋白，並可用作研究白血病相關癌蛋白致病機理的有力工具。
