濁點萃取法(cloud point extraction，CPE)是近年來出現的一種新興的液—液萃取技術，它不使用揮發性有機溶劑，不影響環境。
基本介紹
- 中文名：濁點萃取
- 外文名：cloud point extraction
- 簡稱：CPE
- 類型：液萃取技術
臨界膠束濃度,蛋白質分離純化中的套用,
臨界膠束濃度
表面活性劑的表面活性源於其分子的兩親結構，親水基團使分子有進入水的趨向，而憎水基團則竭力阻止其在水中溶解而從水的內部向外遷移，有逃逸水相的傾向，而這兩傾向平衡的結果使表面活性劑在水錶的富集，親水基伸向水中，憎水基伸向空氣，其結果是水表面好像被一層非極性的碳氫鏈所覆蓋，從而導致水的表面張力下降。表面活性劑在界面富集吸附一般的單分子層，當表面吸附達到飽和時，表面活性劑分子不能在表面繼續富集，而憎水基的疏水作用仍竭力促使疏水基分子逃離水環境，於是表面活性劑分子則在溶液內部自聚，即疏水基*在一起形成核心，親水基朝外與水接觸，形成最簡單的膠團。而開始形成膠團時的表面活性劑的濃度稱之為臨界膠束濃度，簡稱cmc。 當溶液達到臨界膠束濃度時，溶液的表面張力降至最低值 ，此時再提高表面活性劑濃度，溶液表面張力不再降低而是大量形成膠團，此時溶液的表面張力就是該表面活性劑能達到的最小表面張力，用cmc表示。
蛋白質分離純化中的套用
CPE 法可用於分離膜蛋白、酶、動物、植物和細菌的受體，還可以替代一些分離方法如硫酸銨分級法作為純化蛋白的第一步，與色譜方法聯用。另外，CPE 法分離純化蛋白質已經可以實現大規模操作。Minuth等人成功地進行了膽固醇氧化酶濁點萃取的中試研究。雖然使用離心分離器可以使CPE大規模連續進行，但商品離心分離器用於CPE 的效率和容量仍需進一步研究。而且，他們發現相分離操作受細胞培養時產生的表面活性物質影響較大，體系兩相間密度差較小，表面張力較小，含產物的表面活性劑相的流變學行為較複雜，操作較難。表1列出了CPE法近幾年來在蛋白質分離純化中的套用。 (1) CPE法用於分離純化膜蛋白 膜蛋白(內嵌膜蛋白、外圍膜蛋白)疏水性強、難溶於水，抽提內嵌膜蛋白時，既要削弱它與膜脂的疏水性結合，又耍使它保持疏水基在外的天然狀態，較難分離純化。由於表面活性刑具有兩親性，它一直作為腹蛋白理想的增溶劑。增溶時，膜蛋白琉水部分嵌入膠束的硫水核中而與膜脫離，又保持了膜蛋白表面的廢水結構。相分離後，膜蛋白與表面活性劑共同析出，與親水性蛋白質分離。所以，CPE 法在分離純化膜蛋白方面極有優勢。 (2) 與其它分析技術的聯用 CPE 可以作為高效液相色譜(HPLC)、流動注射分析(FIA)、毛細管電泳(CE)等儀器分析的樣品前處理方法，提高檢出靈敏度。表面活性別可以防止樣品吸附在玻璃容器上，易於與FIA中的載液及HPLC中的有機流動相或膠束流動相混合，可以直接進樣。但是在很多套用中需要除去表面活性劑後再與儀器聯用。將萃取物與表面活性劑分離的方法很多。對於CMC>1mM 的表面活性劑如兩性離子表面活性劑可用透析法，但操作時間較長(24h左右)。對於CMC 較小的表面活性劑可通過色譜柱分離除去，如凝膠柱、毛紉管柱等，分離出的表面活性劑可以再利用，也可以作焚燒處理。但CPE作為HPLC 的樣品前處理方法有兩個缺點：第一，常用的表面活性劑在UV區域有很強的背景吸收。第二，操作時間較長，從色譜柱上需用幾個小時洗脫表面活性劑。表面活性劑的洗脫可能會干擾分析物的測定。
