琥珀酸脫氫酶能通過一系列人工電子受體，發生反應催化琥珀酸的氧化。
基本介紹
- 中文名：測定琥珀酸脫氫酶試劑
- 外文名：Determination of succinate dehydrogenase reagents
- 原料：吩嗪二甲酯硫酸鹽
- 特點：人工電子受體
琥珀酸脫氫酶測定方法目前主要有五種。
硫酸甲酯吩嗪（PMS）反應法
琥珀酸脫氫酶能通過一系列人工電子受體，如與PMS（吩嗪二甲酯硫酸鹽），DCPIP（2，6-二氯酚靛酚）等發生反應催化琥珀酸的氧化，而藉助這些中間產物的顏色變化，通過分光光度計檢測即可加以定量反映，其反應式為：①Succinate+PMS→Fumarate+PMSH2；②PMSH2+DCPIP→PMS+DCPIPH2。DCPIP呈藍色，標準的吸收光譜在600nm處，這種色澤可因其還原而漸次變淡，從而600nm處的光密度的變化與DCPIP含量成正比，測定2.6-DPIP的還原速度可以推算出SDH的活力。一分子DCPIP被還原，即代表一分子琥珀酸被氧化。故可測定此反應系統在600nm處的吸收光度變化，來計算SDH的活性。SDH活性計算：（標準－測定）/標準=μmol/min/mg。
鐵氰化鉀[K3Fe（CN）6]還原法
以鐵氰化鉀[K3Fe（CN）6]和琥珀酸鈉為底物，使琥珀酸脫氫酶催化反應將鐵氰化鉀還原為亞鐵氰化鉀[K4Fe（CN）6]，K4Fe（CN）6再與Fe3+作用生成普魯士藍，在700nm波長測定吸光值，以檢測普魯士藍之生成量，作為琥珀酸脫氫酶的還原力，吸光值愈高表示琥珀酸脫氫酶活力愈強。
TTC（氯化三苯四氮唑）法
無色TTC（2，3，5-氯化三苯基四唑）作為人造受氫體，它在細胞呼吸過程中接受氫，還原成三苯基甲膳（TF）。後者以紅色晶體的形式存在於細胞內，採用有機溶劑（如甲苯、乙酸乙醋、三氯甲烷、丙酮或乙醇等）進行萃取。萃取液測定485nm吸光度後，以TTC還原量表示脫氫酶活性，根據標準曲線計算TF生成量，進而求出TTC-脫氫酶活性。
MTT法
MTT是一種黃顏色的染料。活細胞線粒體中琥珀酸脫氫酶能夠代謝還原MTT，同時在細胞色素C的作用下生成藍色（或藍紫色）不溶於水的甲臢（Formazana），經異丙醇作用顆粒溶解顯色。在通常情況下，甲臢生成量與活細胞數成正比，因此可根據光密度570nm處OD值推測出活細胞的數目。
NBT（氯化硝基四氮唑藍）法
NBT易溶於水，呈淡黃色，以NBT為受氫體，接受由琥珀酸鈉鹽被酶作用而脫下的氫，進而形成紫藍色的沉澱，於反應體系中加入PMS，混勻，37℃保溫30min，之後加入TCA終止反應。加異丙醇溶解顯色，混勻，即可於548nm測OD值。規定：30min內548nm下OD值為1.0時的酶量為1個活力單位。比活力=活力單位數/毫克蛋白。
