正式毒性實驗是指最終確定被試化學物質毒性濃度的急性毒性實驗。在預備實驗的基礎上，以幾何級數配置試驗溶液濃度，並設空白對照。將一定數量的實驗生物放置於配置好的試驗溶液中，觀察記錄24、48、72和96h實驗生物的死亡數，再用統計學方法求出各時間間隔內的半數致死濃度。實驗方法有流水式、淨水式或換液式。實驗容器大小及實驗生物數視情況而定。如用魚苗為實驗材料，一般每組放10尾，試驗溶液體積按1L水1g魚的比例安排。需設平行實驗。實驗期間不餵食，試驗溶液溶解氧充足，不低於飽和值的70%。水溫、pH值、硬度保持穩定，並符合一定要求。
