《櫛孔扇貝性別分化關鍵基因的鑑定和功能分析》是依託中國海洋大學，由邵明瑜擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：櫛孔扇貝性別分化關鍵基因的鑑定和功能分析
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：邵明瑜
- 依託單位：中國海洋大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
性別分化是發育生物學研究的永恆課題，但在海洋經濟無脊椎動物尤其是貝類中的研究還很薄弱。本項目擬以櫛孔扇貝為研究對象，在前期建立的性腺發生和分化模式基礎上，採用表達譜差異分析技術對幼貝性腺分化過程中特異表達的基因和精卵巢差異表達基因進行高通量篩選，通過時空表達的real-time PCR分析鑑定關鍵基因，採用原位雜交和免疫組化技術建立其在扇貝性腺發生、分化和發育過程中的表達圖式，結合RNAi沉默基因轉錄實驗探討基因功能，進一步通過靶基因分離初步建立關鍵基因與其它基因的表達調控關係。本研究有望獲得一些扇貝性別分化的相關基因，並鑑定出調控網路中的個別關鍵基因，為闡明扇貝性別分化機理及實現生殖調控奠定基礎。
結題摘要
本項目通過Solexa高通量測序獲得了櫛孔扇貝增殖期精巢和卵巢的表達譜數據，在此基礎上篩選得到10餘條特異或高表達的性別分化相關基因片段。克隆獲得了boule、vtg、17β-HSD8、foxl2、wnt4、β-catenin和dax1基因的全長cDNA 序列，進行了相關生物信息學分析，通過RT-PCR、real-time PCR、原位雜交和免疫組化方法建立了上述基因及dmrt4基因在成體性腺周期和胚胎幼蟲發育過程中的表達圖式。其中，boule、vtg、foxl2和β-catenin高表達於卵巢，17β-HSD8、wnt4、dax1和dmrt4高表達於精巢。通過dmrt4干擾實驗初步建立了成體扇貝RNAi實驗方法，通過添加WNT信號通路抑制劑quercetin體外培養櫛孔扇貝精巢細胞，發現β-catenin基因表達被抑制，證明了櫛孔扇貝中存在經典的Wnt信號途徑，同時dax1基因表達也隨之下調，證明dax1基因為β-catenin基因的下游基因。上述性別分化基因的克隆和分析為闡明扇貝性別分化機理奠定了基礎。
