易錯PCR是指通過改變PCR反應條件來調整PCR反應中的突變頻率，降低聚合酶固有的突變序列的傾向性，提高突變譜的多樣性，使得錯誤鹼基隨機地以一定的頻率摻入到擴增的基因中，從而得到隨機突變的DNA群體，最後用合適的載體克隆突變基因。
基本介紹
- 中文名：易錯PCR
- 外文名：sequentialermr-PronePCR
- 方法：改變PCR反應條件
- 作用：調整PCR反應中的突變頻率
易錯PCR是在採用DNA聚合酶進行目的基因擴增時，通過調整反應條件，如提高鎂離子濃度、加入錳離子、改變體系中四種的dNTPs濃度或運用低保真度DNA聚合酶等，來改變擴增過程中的突變頻率，從而以一定的頻率向目的基因中隨機引入突變，獲得蛋白質分子的隨機突變體。其關鍵在於對合適突變頻率的選擇，突變頻率太高會導致絕大多數突變為有害突變，無法篩選到有益突變;突變頻率太低則會導致文庫中全是野生型群體。理想的鹼基置換率和易錯的最佳條件主要依賴於突變的DNA片段的長度。
通常，經一次突變的基因很難獲得滿意的結果，由此發展出連續易錯 PCR(sequentialermr-PronePCR)策略。即將一次擴增得到的有益突變基因作為下一次擴增的模板，連續反覆地進行隨機誘變，使每一次擴增得到的正向突變累積而產生重要的有益突變。由於易錯PCR涉及的遺傳變化只發生在單一分子內部，故屬於無性進化 (asexualevolution)。它雖然可以有效的產生突變，且操作方法簡單，但其一般只適用較小的基因片段，且突變鹼基中轉換高於顛換，套用範圍較為有限。
