《新菸鹼類殺蟲劑多標記時間分辨螢光免疫分析研究》是施海燕為項目負責人，南京農業大學為依託單位的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：新菸鹼類殺蟲劑多標記時間分辨螢光免疫分析研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：施海燕
- 依託單位：南京農業大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
時間分辨螢光免疫分析（TRFIA）是優於放射免疫分析和酶免疫分析的一種超微量定量免疫分析檢測技術。選擇不同的鑭系元素標記抗原或抗體，可實現小分子化合物的同時檢測。新菸鹼類殺蟲劑自吡蟲啉成功開發以來，已成為一個重要的殺蟲劑品種系列。本項目以幾種代表性的新菸鹼類殺蟲劑為研究對象，通過設計合成不同結構的半抗原，製備相應的單克隆抗體，並利用同源、異源及特異性分析篩選最佳的抗原抗體組合。在此基礎上，將2種以上鑭系離子分別標記到不同新菸鹼類殺蟲劑的單克隆抗體上，利用鑭系離子波長和衰減時間方面的差異性，建立一套兩種以上新菸鹼類殺蟲劑同時檢測的多標記時間分辨螢光免疫檢測體系，並套用於農產品和環境中的殘留分析。將為化學農藥多殘留免疫分析開創新的研究思路，對進一步開發具有自主智慧財產權的農藥多殘留檢測試劑盒有著重要的現實意義。
結題摘要
時間分辨螢光免疫分析（TRFIA）是優於放射免疫分析和酶免疫分析的一種超微量定量免疫分析檢測技術。選擇不同的鑭系元素標記抗原或抗體，可實現小分子化合物的同時檢測。新菸鹼類殺蟲劑自吡蟲啉成功開發以來，已成為一個重要的殺蟲劑品種系列。本項目設計合成了2種新菸鹼類殺蟲劑半抗原，製備了特異性單克隆抗體。在此基礎上，採用直接競爭和間接競爭模式，通過螢光標記、條件最佳化、交叉反應、添加回收及相關性驗證等研究，分別建立了噻蟲胺和烯唑醇間接競爭雙標記時間分辨螢光免疫分析方法及吡蟲啉和對硫磷直接競爭雙標記時間分辨螢光免疫分析方法。 在最佳化條件下，噻蟲胺和烯唑醇的IC50分別為5.08和13.14µg/L，最低檢測限分別為0.021和0.029µg/L；方法除與呋蟲胺（9.4%）和烯效唑（4.28%）有交叉反應外，與其他類似化合物基本無交叉反應；6種基質樣品噻蟲胺的添加回收率為79.3-107.4%，相對標準偏差（RSD）為2.4-8.4%；烯唑醇的添加回收率為80.8-108.7%，相對標準偏差為2.3-9.5%，符合農藥殘留實驗準則要求。用TRFIA對採集的樣品進行檢測，並通過GC進行驗證。結果表明，dual-TRFIA和GC對實際樣品中噻蟲胺和烯唑醇的殘留檢測結果相關性良好。 在最佳化條件下，對硫磷和吡蟲啉的IC50分別為10.87和7.08µg/L，最低檢測限分別為0.025和0.028µg/L；方法除與甲基對硫磷（42.4%）和氯噻啉（103.4%）有交叉反應外，與其他類似化合物均基本交叉反應；5種基質樣品中吡蟲啉的添加回收率在78.9-104.2%之間，RSD為2.4-11.6%；對硫磷的添加回收率為81.5-110.9%，RSD為3.2-10.5%。用TRFIA對實際樣品進行檢測，並通過GC進行驗證，結果表明，dual-TRFIA和GC對實際樣品中對硫磷和吡蟲啉的殘留檢測結果具有高度相關性。對硫磷的相關性方程為y=1.0251x+0.2936，決定係數R2為0.9918；吡蟲啉的相關性方程為y=0.9848 x+1.61，決定係數R2為0.9908。進一步驗證了dual-TRFIA的準確性和可靠性。 本項目研究拓寬了TRFIA的檢測範圍，為該技術在農藥多殘留檢測領域的套用奠定了理論和實踐基礎，對進一步開發具有自主智慧財產權的農藥多殘留檢測試劑盒有著重要的現實意義。
