《新基因BTBD10對泌乳素瘤細胞增殖和凋亡的調控研究》是依託復旦大學，由鹿斌擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：新基因BTBD10對泌乳素瘤細胞增殖和凋亡的調控研究
- 依託單位：復旦大學
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：鹿斌
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
泌乳素瘤發病與其細胞增殖和凋亡的調控異常有關。本課題組近期克隆到BTBD10基因，已證實在垂體有表達，泌乳素瘤較正常垂體表達明顯升高，提示其可能會在泌乳素瘤的發病過程中發揮作用，但是目前尚未有BTBD10在垂體腫瘤中的研究。本課題組前期研究顯示PP4可調控泌乳素瘤細胞的增殖和凋亡。近來研究提示BTBD10可結合PP2A調控Akt/PKB，而PP4正是PP2A 亞家族的重要成員之一。所以我們構想存在BTBD10-PP4-Akt/PKB信號通路調節泌乳素瘤的增殖和凋亡，即BTBD10可結合PP4，通過PP4介導Akt/PKB去磷酸化調節泌乳素瘤的增殖和凋亡。因此本課題旨在套用基因轉染、siRNA干擾及基因敲除等技術研究BTBD10-PP4-Akt/PKB通路對泌乳素瘤細胞增殖和凋亡調控機制，為闡明泌乳素瘤的發病機制及對其防治提供新思路。
結題摘要
研究背景： 本課題組研究顯示垂體瘤細胞較正常垂體細胞BTBD10表達存在明顯差異，推測其可能參與泌乳素瘤的發病。本課題組前期研究提示PP4可能也與垂體泌乳素瘤的發病相關。故此可能存在BTBD10-PP4-Akt/PKB信號通路調節泌乳素瘤的增殖和凋亡。 研究目的和方向： 運用Western blot、基因轉染及siRNA干擾等技術在分子水平和細胞水平驗證BTBD10-PP4-Akt/PKB通路，研究該通路對泌乳素瘤細胞增殖和凋亡調控。 主要內容： 1.免疫共沉澱技術證明BTBD10和PP4c(PP4的調節亞基)間有無相互作用；過表達或干擾BTBD10的表達後觀察泌乳素瘤細胞株MMQ細胞PP4c的表達情況； 2.過表達或干擾BTBD10及PP4c的表達後觀察泌乳素瘤細胞株MMQ細胞Akt及磷酸化Akt蛋白表達變化及多巴胺受體表達變化及NF-kB的變化情況； 3.在Hela細胞中研究PP4c如何調控細胞周期和細胞凋亡； 主要研究結果和關鍵數據： 1.BTBD10和PP4c IP研究顯示BTBD10和PP4之間相互作用不明顯；BTBD10過表達和抑制表達後顯示PP4c變化也不明顯。 2. BTBD10、PP4c和Akt BTBD10抑制表達後p-Akt(磷酸化的AKT)表達顯著下降, BTBD10過表達後p-Akt表達顯著增加。MTT實驗顯示BTBD10過表達組相比空白對照和空轉染組相比，細胞相對活性明顯增強。PP4c抑制表達後p-Akt(磷酸化的AKT)表達改變不明顯，PP4c過表達後p-Akt表達改變也不明顯。 3. PP4c調控細胞周期過表達PP4c基因後顯示Hela細胞增殖受到明顯抑制，G2/M細胞大量增加，提示PP4c可以誘導細胞阻滯於G2/M期。 4. BTBD10及PP4c調控泌乳素瘤多巴胺受體表達 BTBD10或PP4c過表達後多巴胺受體D2表達顯著下降，BTBD10或PP4c抑制表達後多巴胺受體D2表達明顯增加。PP4c過表達和抑制表達調控多巴胺受體均受到NF-kB抑制劑PDTC的抑制。PP4c抑制表達後胞核p65蛋白表達顯著增加，過表達後胞核p65蛋白表達顯著減少。 主要科學意義： BTBD10和PP4c對泌乳素瘤發病發揮調控作用，部分闡明泌乳素瘤的發病機制。BTBD10和PP4c可調控泌乳素瘤多巴胺受體表達
