《新型pH敏感口服納米DNA疫苗的研製》是依託南開大學，由向榮擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：新型pH敏感口服納米DNA疫苗的研製
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：向榮
- 依託單位：南開大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
口服DNA疫苗是一種有效的腫瘤免疫治療方法，但做為DNA疫苗的載體，先前研發的納米顆粒載體難以攜帶DNA通過胃酸環境並進入腸道高效表達腫瘤抗原。我們的前期研究表明，海藻酸在酸性條件下可以形成緻密的高分子網狀結構，起到保護DNA的目的，故此我們提出了pH敏感抗酸納米顆粒DNA疫苗的製備及最佳化策略：（1）套用pH敏感材料海藻酸修飾殼聚糖，提高納米顆粒DNA載體的體內抗酸能力，從而高效的表達腫瘤抗原；（2）海藻酸和殼聚糖屬天然多糖，對正常組織的毒副作用很小，且有較強的免疫源性，有利於巨噬細胞及樹突狀細胞的吞噬；（3）以腫瘤特異性表面分子Legumain為靶向分子，選取4T1小鼠原位乳腺癌為研究模型，體內驗證pH敏感抗酸納米顆粒DNA疫的治療效果。本項目將對殼聚糖納米顆粒的表面修飾、體內的表達情況及體內抑癌效果進行系統的探究，為製備新型納米顆粒DNA疫苗載體及抗腫瘤治療提供了新思路及平台
結題摘要
DNA疫苗是一種很有潛力的乳腺癌輔助生物治療手段。與其他給藥方式相比口服給藥具有安全性好、病人服從性高等有點。本研究利用以海藻酸修飾的殼聚糖納米顆粒（A.C.NPs）為載體，構建由該載體攜帶Legumain DNA製成口服疫苗。並在小鼠乳腺癌模型中驗證了該疫苗的抗腫瘤作用。我們的研究結果表明海藻酸修飾的殼聚糖納米顆粒在PH<3.0的條件下聚集形成毫米級的聚合物；當PH>3.0時解聚分散成為納米級的顆粒。用攜帶有EGFP質粒的A.C.NPs對小鼠進行灌胃，免疫螢光染色及流式細胞儀分析結果均顯示，與未經海藻酸修飾的殼聚糖納米顆粒（C.NPs）相比，三天后小鼠小腸派氏淋巴結顯示出明顯的EGFP表達。在小鼠4T1原位乳腺癌模型中將荷瘤小鼠分別用不同載體包裹的legumain DNA灌胃，結果顯示A.C.NPs載體組攜帶Legmain DNA組其腫瘤體積明顯小於其他對照組。分離脾臟獲得脾細胞與4T1細胞共培養顯示裝載有Legumain DNA的A.C.NPs處理組，其小鼠脾臟活化的細胞毒性T細胞（CD3+/CD8+/CD25+）與PBS對照組相比增加了4.7倍，與C.NPs載體組相比增加了2.3倍。說明A.C.NPs載體能夠有效減少所攜帶的DNA經口服後在胃液中的降解；在小鼠乳腺癌模型中，採用A.C.NPs載體攜帶Legumain DNA製備的口服疫苗能夠增加DNA疫苗的抗腫瘤效果。該研究成果發表在 PLOS ONE. 8( 4 ); 2013. 在完成項目任務的基礎上，我們繼續深入研究了將legumain作為腫瘤治療靶點的探索。通過設計並構建基於legumain剪下底物AAN，並以穿膜肽TAT修飾的抗腫瘤藥物載體。實驗結果顯示我們構建的AAN-TAT-lipo，能有效增加藥物在腫瘤的富集，並實現殺傷腫瘤和重塑腫瘤微環境的雙重作用。該研究成果發表在NATURE COMMUNICATIONS. 5 (4280) 2014. 本課題在四年的研究工作中較好的達到了預期目標，開發了海藻酸修飾的殼聚糖納米顆粒和基於legumain剪下底物AAN並結合穿膜肽TAT的抗腫瘤藥物載體並申請專利。培養博士生4名，碩士生2名，發表標註本課題資助號的SCI論文7篇。
