新型聚胺基酸材料介導的肺腫瘤免疫治療的基礎研究

《新型聚胺基酸材料介導的肺腫瘤免疫治療的基礎研究》是依託浙江大學，由湯谷平擔任項目負責人的面上項目。

基本介紹

• 中文名：新型聚胺基酸材料介導的肺腫瘤免疫治療的基礎研究
• 依託單位：浙江大學
• 項目負責人：湯谷平
• 項目類別：面上項目

項目摘要

為了提高肺癌免疫治療中的特異性及治療安全性問題，我們用新型納米材料介導的免疫方法對其進行基礎研究。在免疫治療研究中，通過提高對減毒沙門氏菌的轉化效率，使其快速、高效地誘導針對肺癌血管內皮細胞的免疫反應，以達到抑制腫瘤增殖、浸潤和轉移的目的。為此研究目標，研究將以聚天冬氨酸為基本骨架，經過側基修飾後鍵合低分子量聚乙烯亞胺，製成一種新型的納米載體。通過其攜帶VEGFR-2質粒對減毒沙門氏菌進行轉化，並由減毒沙門氏菌感染樹突狀細胞，從而使得VEGFR成為特異性抗原而被自身免疫系統識別，引發機體的免疫反應，抑制腫瘤細胞血管的生成，達到治療腫瘤的目的。研究將對納米載體材料結構進行最佳化，對納米材料的體外生物學行為進行探討，對納米載體材料介導的免疫治療進行體內生物學行為研究。為開發臨床使用的腫瘤口服疫苗提供可靠的理論依據和技術路線，為預防和治療肺癌提供有效的科學方法。

結題摘要

為了提高肺癌免疫治療中的特異性及治療安全性問題，我們用非病毒載體材料介導的免疫方法，通過提高對沙門氏菌的轉化效率，使其快速、高效地誘導針對肺癌血管內皮細胞的免疫反應，達到抑制腫瘤的目的。研究將以非病毒載體為基本骨架，製成納米載體，通過其攜帶質粒對沙門氏菌進行轉化，並由沙門氏菌感染樹突狀細胞，使得其成為特異性抗原而被自身免疫系統識別，引發機體的免疫反應，達到治療腫瘤的目的。 研究用陽離子非病毒基因載體，檢測了載體對細菌生存的影響，結果表明，在低劑量時，對細菌細胞壁的影響較小，而隨著劑量的增加，且呈現聚集的狀態，表明陽離子非病毒載體材料會導致細菌的黏連，同時檢測了細菌生長周期的影響，掃描電鏡發現，低劑量的聚陽離子球形聚合物，可以黏附在細菌的表面，隨著材料量的增加，大量球形聚合物聚集在細菌的表面，導致細菌的變形和死亡。我們考察了陽離子非病毒載體包被的減毒沙門氏菌的細胞吞噬和進入細菌的途徑，表明低劑量的陽離子非病毒載體材料包被的沙門氏菌能有利於小鼠單核巨噬細胞RAW264.7的細胞吞噬，高劑量的陽離子非病毒載體材料包被的細菌進入細胞質的量較少。用TEM考察了陽離子聚合物包被減毒沙門氏菌進入小鼠單核巨噬細胞RAW264.7 的途徑，結果表明，其為多途徑的過程。溶酶體染色實驗表明，陽離子聚合物包被的細菌可以同時被細胞吞噬進入溶酶體。 研究提取小鼠腹腔巨噬細胞，進行陽離子非病毒載體材料包被減毒沙門氏菌溶酶體逃逸，證明其可以逃逸。用lysosensorBule-green 試劑盒檢測小鼠腹腔巨噬細胞溶酶體的PH，發現細菌聯合材料 後使小鼠腹腔巨噬細胞PH值降低，溶酶體低PH報告有利於巨噬細胞的抗原遞呈。進行了陽離子非病毒載體材料包被的減毒沙門氏菌對轉染效率的影響，發現包被後的細菌能明顯提高EGFP的轉染效率。 體內實驗表明，通過口服的方式，連續三天灌胃，檢測小鼠脾臟的CD3CD4和CD3CD8細胞，包被陽離子非病毒載體材料的沙門氏菌對CD3CD4的細胞沒有影響，能提高CD3CD8細胞的數量，而CD3CD8細胞是重要的效應T細胞，通過CTL途徑直接殺傷腫瘤細胞。研究考察了材料對於小腸的毒性，結果顯示包被後的減毒沙門氏菌能夠降低對小鼠小腸的毒性。進一步證明。包被陽離子非病毒載體材料的減毒沙門氏菌將會成為一種更加有效更加安全的腫瘤免疫治療的口服疫苗。