《新型成骨誘導因子Nell-1ΔE的功能及其分子機制研究》是依託北京大學，由陳峰擔任負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：新型成骨誘導因子Nell-1ΔE的功能及其分子機制研究
- 項目負責人：陳峰
- 依託單位：北京大學
- 項目類別：青年科學基金項目
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
很多正頜與顱面手術都需要易獲取和可靠的骨移植材料。然而目前作為骨移植金標準的自體骨移植，在髂嵴取骨常伴發供區疼痛、步態異常等多種不良後果，且顱骨抑制物的感染損傷與血腫常使自體移植物達不到理想的成骨效果，因此亟需更好的方案改善其在骨組織修復臨床的套用。利用成骨誘導分子促進骨組織損傷原位修復是解決骨自體移植問題的一個好方法。現有多篇Nell-1蛋白顯著促進骨再生特性的研究被報導。Nell-1蛋白成骨誘導能力可以被用於骨形成和再生的多種狀況（如牙槽骨移植，顱面骨牽張成骨和部分長骨缺損修復等）。我們最新克隆發現的Nell-1新型轉錄本Nell-1ΔE具有更顯著的成骨誘導能力，並存在著區別於Nell-1蛋白誘導成骨的信號轉導機制。繼續深入研究Nell-1ΔE蛋白的功能，不斷探索新的成骨誘導因子的功能機制將有助於發現更安全、有效的臨床治療方法，最終使新分子骨形成作用的潛力能套用到轉化醫學研究。
結題摘要
研究背景：很多正頜與顱面手術都需要易獲取和可靠的骨移植材料。然而目前作為骨移植金標準的自體骨移植，在髂嵴取骨常伴發供區疼痛、步態異常等多種不良後果，因此亟需更好的方案改善其在骨組織修復臨床的套用。不斷探索新的成骨誘導因子的功能機制將有助於發現更安全、有效的臨床治療方法。 主要內容：探索Nell-1ΔE 基因在顱頜面骨發育中的生物學功能，進一步闡明Nell-1ΔE 誘導成骨的分子機制，將它在顱面生長過程中誘導骨形成的特性，套用到轉化醫學研究中，並最終促進其在骨損傷修復領域的臨床套用。主要內容包括： （1） Nell-1ΔE 特異性表達譜及其在促進成骨方面的作用。我們將檢測Nell-1ΔE 在小鼠頭部組織發育的時間特異性表達譜，以及在不同類型牙源性幹細胞中進行免疫組化染色，以說明Nell-1ΔE 表達及其在促進成骨方面的作用。 （2） Nell-1ΔE 行使功能的分子機制。篩選並鑑定與Nell-1ΔE 相互作用的蛋白以揭示其誘導成骨的細胞信號轉導通路。 重要結果： （1） 根據Nell-1ΔE 特異性多肽表位製備其特異性抗體，採用免疫組化技術檢測Nell-1ΔE 蛋白在小鼠頭部組織不同發育時期的特異性表達譜； （2） 將Nell-1ΔE 基因構建到帶有flag-tag 的pcDNA3.1表達載體中，利用親和層析的方法純化Nell-1ΔE 蛋白。 （3）利用免疫共沉澱與質譜分析聯用方法篩選與Nell-1ΔE 直接相互作用的蛋白。然後利用綠色螢光蛋白融合表達載體檢測其在細胞內的共定位。 關鍵數據： （1）免疫組化技術檢測Nell-1ΔE 蛋白在小鼠頭部組織不同發育時期的特異性表達譜； （2）免疫組化技術檢測Nell-1ΔE 蛋白在不同牙源性幹細胞中的特異性表達譜； （3）Nell-1及Nell-1ΔE蛋白的在哺乳動物細胞里的表達與純化； （4）Nell-1及Nell-1ΔE蛋白免疫共沉澱篩選出的相互作用蛋白韋恩圖； （5）Nell-1及Nell-1ΔE融合綠色螢光蛋白在細胞內的共定位。 科學意義：我們最新克隆發現的Nell-1 新型轉錄本Nell-1ΔE存在與Nell-1蛋白不同的表達譜，以及不同的相互作用蛋白與信號通路，預示其嶄新的功能及臨床套用前景。
