《整合素αvβ3及其配體OPN在胚胎著床中的作用機制研究》是依託揚州大學，由張曉梅擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：整合素αvβ3及其配體OPN在胚胎著床中的作用機制研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：張曉梅
- 依託單位：揚州大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
胚胎著床是一個複雜的過程，包括定位、黏附、入侵併最終植入子宮內膜。著床成功的必要條件是胚胎的成熟和子宮內膜容受性的建立。許多分子參與調節胚胎著床過程的建立，但詳細的分子機制仍不清楚，這對提高助孕技術水平是極大的障礙。整合素αvβ3及其配體OPN是我們課題組前期套用Gene Array 技術篩選出的子宮內膜容受性相關基因，我們的進一步研究證實二者在著床窗期子宮內膜組織中明顯高表達，且主要由子宮內膜上皮細胞分泌，它們如何調節子宮內膜容受性進而影響胚胎著床的機制是進一步研究的重點。本課題擬通過細胞實驗和動物實驗，研究雌、孕激素對αvβ3及OPN的調節，套用基因超表達、RNA干擾及特異性抗體阻斷技術研究αvβ3及其配體干預後子宮內膜上皮細胞增殖和黏附能力的變化、小鼠胚胎粘附、擴展及宮內著床能力的變化，探討αvβ3及其配體OPN在胚胎著床過程中的作用機制,為進一步克服早期胚胎丟失提供新途徑。
結題摘要
本課題在國家自然科學基金的資助下，成功建立了有效的RL95-2-BeWo球狀體共培養體外著床模型，研究不同濃度的雌二醇、孕酮和肝素結合表皮生長因子(HB-EGF)的刺激對子宮內膜上皮細胞整合素β3及其配體骨橋蛋白表達的影響及其對共培養模型粘附和鋪展能力的影響.通過構建整合素αvβ3 真核表達載體，使子宮內膜上皮細胞αvβ3 水平超表達，觀察其對胚胎細胞球狀體黏附的影響，初步探討該模型在胚胎粘附-植入方面的多因素調節以及整合素αvβ3 在胚胎著床過程中的可能作用機制，為進一步闡明其在胚胎著床及生殖過程中的功能及分子機制提供實驗基礎。 方法 1、建立RL95-2-BeWo共培養體外著床模型 2、多因素調節RL95-2-BeWo共培養體外著床模型粘附-植入功能： 3、構建pcDNA3.1-3FLAG-ITGAV、pcDNA3.1-3FLAG-ITGB3真核表達載體，通過脂質體轉染人子宮內膜上皮細胞( RL95-2 細胞)。 4、經Real time RT-PCR 檢測整合素αv (ITGAV)、整合素β3 (ITGB3)及骨橋蛋白(OPN)的mRNA 表達。 5、經流式細胞術、間接免疫螢光檢測ITGAV、ITGB3 的蛋白表達。 6、通過黏附實驗觀察和分析整合素αvβ3 超表達對胚胎與子宮內膜上皮細胞的黏附情況的影響，經間接免疫螢光檢測共培養體系ITGAV、ITGB3 及OPN 的表達。 結果和結論 1、成功建立 RL95-2-BeWo共培養體外模型。 2、整合素β3和OPN在RL95-2單層細胞、BeWo單層細胞和BeWo球狀體的細胞質和膜表面表達，其表達受多因素調節。 3、高濃度E2不利於胚胎粘附，高濃度P4和HB-EGF能促進胚胎粘附和植入。 4、成功構建了ITGAV、ITGB3真核表達載體。 5、與單獨轉染pcDNA3.1-3FLAG-ITGAV、pcDNA3.1-3FLAG-ITGB3相比，ITGAV、ITGB3真核表達載體共轉染使RL95-2 細胞的整合素αv、整合素β3表達水平均明顯升高。 6、 RL95-2 細胞整合素αvβ3 超表達顯著提高Bewo球狀體與RL95-2 細胞單層的黏附率，促進Bewo球狀體在RL95-2 細胞單層的擴展。 7、整合素αvβ3 和OPN介導胚胎在子宮內膜細胞上的黏附與侵入，在胚胎著床中發揮重要作用。
