放射性競爭結合分析

概述

是利用特異抗體與標記抗原和非標記抗原的競爭結合反應，通過測定放射性複合物量來計算出非標記抗原的一種超微量分析技術。它的代表技術是放射免疫分析。

（一）基本原理

放射免疫分析的基本原理是利用放射性標記的抗原和非標記抗原同時與限量的特異性抗體進行競爭性免疫結合反應。這種競爭結合反應可用下式表示：

其中*Ag：標記抗原；Ag：非標記抗原； Ab：特異性抗體；Ag-Ab：抗原-抗體複合物； *Ag-Ab：標記抗原-抗體複合物。* Ag -Ab的量（因變數）與Ag的量（自變數）之間存在的競爭性抑制數量關係是放射免疫分析的定量基礎，這種數量關係可以由標準競爭抑制曲線（簡稱標準曲線）來表示。

（二）基本試劑

放射免疫分析的反應中主要包括三種試劑；抗體、標記抗原、非標記標準抗原（標準品）。除此之外，現在許多試劑盒還提供分離試劑或材料，緩衝液及質量控制用品等。

（1）抗體

放射免疫測定，需要選擇親和力大、特異性強、滴度高的使用。

（2）標記抗原

要求用於標記抗原的放射性核素比活度要高，放射化學純度要好，還要有很好的免疫活性。主要有125I、14C和3H。

（3）標準品

對標準品要求：①應與被測物屬同一物質，其化學結構和免疫活性相同；②放射化學純度高，影響分析的雜質少；③定量精確。

（4）分離方法

分離的目的是放射免疫反應達到平衡後，使抗原抗體複合物和游離抗原分離，兩者分離後才能分別測量其放射性，理想的分離技術應具備既安全又迅速，不受其它因素干擾，操作簡便，重複性好等優點。分離方法主要有：雙抗體法、沉澱法、雙抗體法+沉澱法、吸附分離法、固相分離法等。

（5）放射性測量儀器

如用 125 I做標記，常用γ井型計數器對γ射線進行測量。如用3H或14C做標記用液體閃爍計數器對β射線進行測量。