探討溶酶體膜蛋白Sidt2通過自噬影響肝臟脂肪代謝的機制

《探討溶酶體膜蛋白Sidt2通過自噬影響肝臟脂肪代謝的機制》是依託上海交通大學，由張惠文擔任項目負責人的面上項目。

基本介紹

• 中文名：探討溶酶體膜蛋白Sidt2通過自噬影響肝臟脂肪代謝的機制
• 項目類別：面上項目
• 項目負責人：張惠文
• 依託單位：上海交通大學

項目摘要

Sidt2是申請人2011年結題NSFC青年項目和2012年面上項目的研究主體。我們培育了Sidt2全身剔除小鼠，該鼠肝臟脂質貯積，血清肝酶甘油三酯水平升高，類似人類非酒精性脂肪肝病，高脂飼養後上述異常更加顯著。該鼠血清β-羥丁酸顯著減少，提示脂肪降解通路脂肪酸β-氧化水平下降；同時自噬標記蛋白LC3-II減少，而自噬底物p62蓄積，提示自噬水平下降。本項目擬在已有Sidt2 Flox小鼠基礎上，培育僅肝臟Sidt2剔除小鼠，觀察是否同樣有脂質代謝紊亂，以明確Sidt2是否直接影響肝臟脂質代謝。並用分子生物學及核素標記等技術，在動物和細胞水平研究Sidt2通過自噬信號通路調節肝臟脂質代謝，明確Sidt2缺陷引起脂肪肝的機制。並擬細胞水平研究在一肥胖患者發現的人類Sidt2基因遺傳保守位點的點突變是否對脂質代謝及自噬有影響。通過該項目的研究，預期能發現Sidt2是干預治療脂肪肝病的新靶點。

結題摘要

目的:本研究前期利用Cre/Loxp系統成功構建了Sidt2全身敲減小鼠，研究發現小鼠sidt2基因全身敲除存在肝臟脂質代謝障礙。為排除其他組織器官的影響對肝臟脂質代謝產生繼發性影響，本項目擬建立肝臟組織特異性剔除小鼠模型，研究酶體膜蛋白Sidt2調控肝臟脂肪代謝的機制。方法:構建肝臟特異敲除Sidt2小鼠及其對照組小鼠，普食和高脂餵養下觀察兩組小鼠體重增長情況，進食量，肝臟重量；HE染色和油紅Ｏ染色觀察小鼠肝臟病理差異；生化檢測小鼠肝臟甘油三脂，膽固醇含量，血清游離脂肪酸含量；全自動生化檢測儀分析小鼠血清甘油三酯，膽固醇，谷丙轉氨酶和穀草轉氨酶含量；micro-CT檢測小鼠脂肪組織體積；WB檢測自噬相關蛋白LC3Ⅱ，P62的表達水平；電鏡觀察小鼠自噬囊泡；原代培養肝細胞檢測BafA1處理條件下LC3Ⅱ，P62的表達水平。Co-IP檢測Sidt2的相互作用蛋白。結果:普食和高脂餵養條件下肝臟特異敲除小鼠體重、進食量、肝臟重量均無明顯差異；HE染色和油紅O染色顯示肝臟特異敲除小鼠肝臟脂質貯積，肝臟甘油三酯含量增加，高脂餵養差距更加明顯，且轉氨酶明顯升高。WB檢測肝臟LC3Ⅱ，P62水平增高。電鏡下脂滴增多，自噬囊泡增多。肝臟特異性敲除Sidt2小鼠來源肝細胞LC3Ⅱ增高。高脂刺激下，mTOR信號通路激活受阻。結論 本研究證實了Sidt2是肝臟脂質代謝的一個重要蛋白。Sidt2可能通過mTOR信號通路參與自噬影響脂質代謝。我們的研究結果豐富了對 Sidt2蛋白功能的認識，補充了自噬溶酶體相關蛋白的功能，為未來脂質代謝類疾病提供了理論基礎。