《慢病毒介導siRNA靶向干擾PLTP表達對膽固醇逆向轉運的作用》是依託四川大學，由田麗擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：慢病毒介導siRNA靶向干擾PLTP表達對膽固醇逆向轉運的作用
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：田麗
- 依託單位：四川大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
磷脂轉運蛋白(PLTP)作為脂質轉運家族的一員，不但在脂蛋白代謝中起調控作用，還調節膽固醇的代謝。PLTP缺陷和PLTP轉基因小鼠介導較少的巨噬細胞的膽固醇流出，但高密度脂蛋白(HDL)濃度差異調整(與野生型相比PLTP轉基因和缺陷小鼠有顯著的降低HDL水平)後與野生型小鼠相同的水平，這種差異就不存在了。PLTP在膽固醇逆向轉運(RCT)中發揮何種作用(促進或抑制)？答案仍然不是很明確。我們推測，其可能涉及與動脈粥樣硬化(AS)有關的HDL代謝和功能的變化。本項目擬通過：①篩選高效沉默PLTP表達的siRNA，構建表達siRNA的重組載體並進行慢病毒包裝；②在整體動物和細胞水平，探討siRNA下調PLTP表達，HDL亞類分布、RCT、RCT相關因子及動脈病變的變化。本研究將明確PLTP表達變化與RCT之間的關係，對於PLTP作為防治AS的新靶標提供新的依據。
結題摘要
磷脂轉運蛋白(PLTP)是一種多功能蛋白，不僅存在於血漿中發揮脂質轉運作用，而且存在於細胞高爾基體和內質網內參與脂蛋白的成熟與分泌。PLTP在脂蛋白代謝中的主要作用是磷脂轉移活性，即調節高密度脂蛋白(HDL)顆粒大小和亞類組成，介導兩個HDL的融合，產生大顆粒HDL2和Preβ-HDL,而磷脂轉移時重塑HDL的先決條件。給PLTP小鼠餵養高脂肪飲食，其不再具有抗動脈粥樣硬化(AS)的作用，提示PLTP在AS過程中的作用是複雜和多面的，需要進行更為細緻的研究。但是PLTP在膽固醇逆向轉運(RCT)中發揮何種作用(促進或抑制)，答案仍然不是很明確。其可能涉及與AS有關的HDL代謝和功能變化上。但目前對於從HDL亞類動態變化的角度探討PLTP表達變化與RCT之間關係的研究則鮮有報導。我們的研究通過篩選高效沉默PLTP表達的siRNA，構建表達siRNA重組載體並進行慢病毒包裝；將包裝好的慢病毒液經尾靜脈注入apoE基因缺失的小鼠並給以高膽固醇飲食餵養。結果顯示與空病毒組比較，血漿HDL水平在病毒組呈現一個下降，大顆粒HDL濃度及百分比在病毒組高於空病毒組，並且中顆粒及小顆粒HDL濃度及百分比是低於空病毒組；此外，對於低密度脂蛋白(LDL)亞類的分析也發現，小而密低密度脂蛋白(sd-LDL)顆粒在空病毒組[mean LDL size (24.53 ± 0.15nm)]較病毒組[mean LDL size (25.04 ± 0.61nm)]更為顯著。進一步研究顯示表明，組織載脂蛋白AI (ApoAI), 三磷酸腺苷結合轉運體AI (ABCAI), 卵磷脂-膽固醇醯基轉移酶(LCAT), 肝脂酶(HL), 脂蛋白脂酶(LPL)以及B族I型清道夫受體(SR-B1)表達在病毒組較空病毒組有升高的趨勢。與此同時， 病理組織學對於主動脈進行油紅O染色結果也顯示，病毒組小鼠其動脈粥樣硬化病變程度較空病毒對照組減輕。所有這些資料提示沉默PLTP的表達有助於增強RCT。儘管HDL-C水平被認為是與AS發展負相關，但我們的結果卻表明，我們更應該關注HDL顆粒的分布變化。PLTP作為AS發展的一個主要的危險因素，抑制PLTP表達則有助於RCT速率和效率的提高。因而，PLTP抑制劑也可能作為防治AS發生，發展的有效治療措施。基於此，我們的研究則可能為PLTP抑制劑的臨床使用提供了一定的理論依據。
