《惡性黑素瘤侵襲、轉移的新機制：Wnt5a/Ca2+/Calcineurin/NFAT信號通路》是依託中國人民解放軍第四軍醫大學，由廖文俊擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：惡性黑素瘤侵襲、轉移的新機制：Wnt5a/Ca2+/Calcineurin/NFAT信號通路
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：廖文俊
- 依託單位：中國人民解放軍第四軍醫大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
黑素瘤是一種高惡性、易轉移、預後差的惡性腫瘤，但其侵襲、轉移的機制尚不清楚，目前認為Wnt5a/Ca2+通路參與了黑素瘤的進展，但精確的調控機制仍不明確，而且研究結果有矛盾之處。我們曾發現在不同發展階段的黑素瘤細胞株中Wnt5a的表達及細胞內Ca2+濃度均有不同程度的增高，NFAT（Ca2+依賴性磷酸酶calcineurin的反應性轉錄因子）也有高表達，推測在Wnt5a與NFAT之間存在一條Wnt5a/Ca2+/calcineurin/NFAT通路。本課題將對該通路在黑素瘤侵襲轉移中的作用及其分子調控機制進行全面探討。擬採用免疫組化、RT-PCR、Western blot、Ca2+成像、基因轉染、RNA干涉、藥物處理及動物實驗等技術，從組織水平、細胞水平及活體實驗三方面觀察該通路的激活狀態，以及調控該通路對黑素瘤細胞侵襲轉移的影響。有望為進一步揭示黑素瘤的發病機制及分子靶向治療奠定基礎。
結題摘要
惡性黑素瘤是一種高惡性、易轉移、預後差的惡性腫瘤，但其侵襲、轉移的精確機制尚不清楚。研究發現：Wnt5a/Ca2+通路參與了黑素瘤的發展過程， 活化T細胞核因子（NFAT）是一種Ca2+依賴的轉錄因子，與多種惡性腫瘤的發生、發展相關。我們的前期研究工作發現，在不同發展階段的黑素瘤細胞株中，Wnt5a的表達及細胞內Ca2+濃度均有不同程度的增高，NFAT也有高表達，因此推測在Wnt5a與NFAT之間存在一條Wnt5a/Ca2+/Calcineurin/NFAT信號通路。在惡性黑素瘤中，證實Wnt5a/Ca2+/Calcineurin/NFAT信號通路的存在及其調控機制、明確該通路在惡性黑素瘤發病機制中的作用對於黑素瘤的靶向治療將具有重要的意義。本項目首先利用免疫組織化學、RT-PCR、雷射共聚焦法及Western blot檢測了惡性黑素瘤中Wnt5a/Ca2+/Calcineurin/NFAT信號通路中信號分子的表達情況，證實了該通路的激活狀態；同時利用慢病毒包裝系統構建Wnt5a的過表達載體和Wnt5a的siRNA表達載體，轉染黑素瘤細胞株，套用Western blot、平板克隆試驗、MTT、劃痕試驗及Transwell試驗檢測轉染後黑素瘤細胞中信號分子的表達情況及細胞的增殖、侵襲能力的變化，證實wnt5a高表達可以通過激活下游信號分子促進黑素瘤的增殖、侵襲能力。通過檢測環孢素A(CsA)處理過的惡性黑素瘤細胞系的細胞生物學性狀，發現靶向抑制Calcineurin可以抑制黑素瘤細胞的侵襲能力，該研究為拓寬轉移性黑素瘤的治療思路、進一步揭示惡性黑素瘤的發病機制及分子靶向治療奠定了基礎。
