庖肉培養基是由牛肉浸液、蛋白腖、酵母膏、磷酸二氫鈉、葡萄糖、可溶性澱粉、碎肉渣等製成的裝置。
牛肉浸液 1000mL
蛋白腖 30g
酵母膏 5g
磷酸二氫鈉 5g
葡萄糖 3g
可溶性澱粉 2g
碎肉渣 適量
pH 7.8
1 稱取新鮮除脂肪和筋膜的碎牛肉500g,加蒸餾水1000mL和1mol/L氫氧化鈉溶液25mL,攪拌煮沸15min,充分冷卻,除去表層脂肪,澄清,過濾,加水補足至1000mL。加入除碎肉渣外的各種成分,校正pH。
2 碎肉渣經水洗後晾至半乾,分裝15mm×150mm試管約2~3cm高,每管加入還原鐵粉0.1~0.2g或鐵屑少許。將上述液體培養基分裝至每管內超過肉渣表面約1cm。上面覆蓋溶化的凡士林或液體石蠟0.3~0.4cm。121℃高壓滅菌15min。
庖肉培養基(用於培養和保藏厭氧菌)
(1)去膘牛肉:取已去筋膜、脂肪的牛肉500g,切成黃豆大小的顆粒,放入盛有1000ml蒸餾水的燒杯中,用文火煮沸約1h。
(2)過濾:用紗布過濾後取若干牛肉渣粒裝入亨蓋特滾管或普通試管,裝量達15mm左右的高度。在於試管中加入PH7.4~7.6的牛肉膏蛋白腖液體培養基10~12ml,最後塞上黑色異丁基橡膠塞。
(3)滅菌:在異丁基橡膠塞上插1枚注射器針頭,放入滅菌鍋內,於121℃下滅菌20min。滅菌後立即拔去針頭,並塞緊管塞。若以無氧法分裝成的無氧培養基的亨蓋特滾管,則可免插注射器針頭,但要將各滾管塞壓緊後再進行滅菌,這樣製備成的滾管稱為PRAS培養基(或稱為預還原性厭氧無菌培養基),使用前也不必驅氧,但需無氧無菌操作法轉移或接種。
(4)使用前除氧:若厭氧培養基在存放中有氧氣滲入,使用前置水浴中煮沸10min,以除去溶入的氧,在高純氮氣飽和下冷卻後避氧無菌操作接種。