幽門螺桿菌分子生物學檢查

幽門螺桿菌分子生物學檢查是利用分子生物學技術如生物晶片檢測、原位雜交、聚合酶鏈反應（PCR）等進行幽門螺桿菌（Hp）感染檢測、菌株鑑別、耐藥性試驗及流行病學研究的方法。

基本介紹

• 中文名：幽門螺桿菌分子生物學檢查
• 查前準備：主要是獲取待檢標本
• 臨床意義：對Hp感染檢測、菌株鑑別等

檢查前準備

主要是獲取待檢標本。待檢標本可為胃或十二指腸黏膜活檢組織、胃液、牙菌斑、脫蠟後的組織切片或糞便。

操作方法

1.生物晶片技術
（1）HpDNA晶片技術：
①根據檢測目的進行探針設計：應注意：長度為40～60nt，避免內部髮夾結構，避免探針相互配對，避免和人基因組形成過多配對。
。探針的種植：將合成好的探針用自動點樣裝置點於硝酸纖維素支持膜上。
②雜交樣品準備：用PCR法擴增HpDNA，或用覆蓋探針的引物擴增HpDNA。
③雜交及檢測：樣品熱變性或鹼變性後直接加到晶片上進行雜交反應，清洗後加入雙鏈DNA特異結合螢光材料。
④基因晶片閱讀儀閱讀。
（2）Hp肽晶片技術
又稱Hp蛋白晶片技術。與DNA晶片技術相似，此技術將多種Hp蛋白成分或對應的抗體分別固定在晶片片基上，同步檢測多重Hp抗原或抗體成分。
2.原位雜交技術
（1）切片預處理：對切片進行復溫、PBS（磷酸鹽緩衝液）浸洗、乙酸酐醯化、鹽酸處理、蛋白酶K孵育、PBS復洗。
（2）預雜交和雜交：預雜交液孵育、封閉液阻斷、加熱變性、冰浴、滴加雜交液、孵育過夜（16~20小時）、SSC（標準檸檬酸鹽溶液）洗。
（3）顯色：ABC免疫組化法顯色。
3.聚合酶鏈技術
（1）製備模板DNA：樣本加入TE液混勻、SDS（十二烷基硫酸鈉）液及蛋白酶K液破壞細胞膜及結合於DNA上蛋白質、水浴、加入苯酚混勻離心、取上層水相，加入氯仿/異戊醇（24:1）混勻後離心、重複離心、取上層水相加入醋酸鈉及無水乙醇、-30℃放置1h、離心、棄上清、70%乙醇洗滌、加入TE、-20℃保存。
（2）擴增反應：加入去離子水、緩衝液、dNTP（硫代磷酸二乙基硝酸酯）混合液、引物1、引物2、礦物油、模板DNA，瞬時離心後預變形、降溫加入Taq（DNA聚合）酶、根據引物設定不同參數進行循環，結束後離心4℃保存備用。
（3）電泳凝膠分析：製備瓊脂糖凝膠、產物與緩衝液混合、置凝膠於TAE液中、100V電壓電泳30min、紫外燈下觀察。

臨床意義

1.生物晶片雜交技術中DNA晶片技術可對Hp的標識基因、毒力基因進行快速、大規模篩查，為菌種鑑定、基因分型、快速診斷提供高效、快捷的技術手段，在基因水平上對相關菌株特徵有更全面的了解；蛋白晶片技術可檢測Hp的毒素蛋白、耐藥相關蛋白、生物標誌物等，為評估Hp感染的危險性提供依據。
2.原位雜交技術可用於研究治療前後胃內Hp形態變異體的鑑定、細菌與胃黏膜的關係、明確Hp致病基因在胃上皮DNA中的整合情況等。
3.聚合酶鏈反應可用於Hp的分型並辨別其來源；臨床多用來進行治療後菌株復發和再感染的鑑別；檢測Hp對抗生素耐藥的突變位點；判斷Hp對克拉黴素、阿莫西林、甲硝唑、四環素及喹諾酮類藥物的耐藥情況，提供抗生素選擇方案。