《平滑肌祖細胞在哮喘氣道重塑中的作用及其機制研究》是依託同濟大學，由宋小蓮擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：平滑肌祖細胞在哮喘氣道重塑中的作用及其機制研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：宋小蓮
- 依託單位：同濟大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
近年外周血中發現一類細胞―平滑肌祖細胞（SPC）。它被認為是平滑肌前體細胞，主要源自骨髓，同時具有幹細胞和平滑肌細胞的部分特徵。現研究表明它是血管重構過程中新生內膜平滑肌細胞的重要來源。我們前期研究發現哮喘小鼠外周血中CD34、MHC表達陽性的單個核細胞增多，提示存在SPC增多可能，SPC尾靜脈注射後示蹤提示小鼠氣道平滑肌層部分細胞來自外周血，因此推測SPC在氣道重塑中亦可能發揮作用。本研究擬通過檢測哮喘大鼠與正常大鼠外周血中平滑肌祖細胞含量的差異，觀察其與哮喘狀態的相關性；再以雌性哮喘大鼠為研究對象，經尾靜脈注入雄性來源SPC，以原位雜交檢測氣道平滑肌層和分離純化後的氣道平滑肌細胞中雄性來源細胞的比例，觀察平滑肌祖細胞在雌性哮喘大鼠氣道的定植和分化情況；通過西司莫羅抑制平滑肌祖細胞，觀察哮喘氣道重塑的相應改變，力求闡明外周血平滑祖細胞參與哮喘氣道重塑的情況，為防治哮喘氣道重塑提供新思路。
結題摘要
我們通過卵蛋白霧化吸入成功製作哮喘動物模型，哮喘模型組小鼠用1％卵蛋白（OVA）超聲霧化吸入，連續激發6周，至咳嗽、噴嚏、氣喘。證明大鼠哮喘動物模型製作成功。卵蛋白霧入吸入製作哮喘動物模型促進大鼠外周血中單個核細胞表達CD34以及MHC顯著增加，提示平滑肌祖細胞的增加。已成功採用全骨髓貼壁法分離雄性大鼠骨髓間充質幹細胞，骨髓單個核細胞接種於培養瓶後，細胞呈圓型，大小不一，懸浮於培養液中。24 h後部分細胞開始貼壁，呈圓形或多角形。證明成功分離大鼠MSC。其次，我們檢測PIC對支氣管哮喘小鼠模型氣道黏膜屏障的影響及其與GEF-H1/RhoA/ROCK 信號通路的相關性。並且觀察了 PIC 對支氣管哮喘小鼠氣道黏膜屏障的影響，同時檢測GEF-H1/RhoA/ROCK信號通路活性及其與哮喘小鼠氣道黏膜屏障損傷的相關性。我們首先建立PIC 誘導支氣管哮喘模擬病毒感染小鼠模型，並設立對照，共包括對照組、PIC 刺激組、支氣管哮喘+PBS 刺激組、支氣管哮喘+PIC 刺激組等四組，激發末次後24 小時收集標本，再通過免疫組化，最後運用雷射共聚焦顯微鏡觀察氣道黏膜中ZO-1 蛋白表達，並比較組間差異；另外也採用了RT-PCR及Western blot 技術檢測小鼠肺組織中GEF-H1、RhoA及ROCKmRNA及蛋白含量，並比較組間差異；在後續的實驗中，我們通過從鼻腔外源性分別給予ROCK 抑制劑（Y27632）、RhoAsiRNA 以及GEF-H1siRNA預處理後，觀察小鼠氣道黏膜中ZO-1 蛋白表達及肺組織中GEF-H1、RhoA 及ROCK mRNA 及蛋白含量。
