《差異miRNA在子癇前期胎盤組織中的表達和功能研究》是依託中國人民解放軍第四軍醫大學，由尹國武擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：差異miRNA在子癇前期胎盤組織中的表達和功能研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：尹國武
- 依託單位：中國人民解放軍第四軍醫大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
子癇前期(PE)是人類妊娠期特有疾病，嚴重威脅母嬰健康，其發病機理至今不明，胎盤滋養細胞功能障礙是PE發病的病理基礎。新近研究表明，miRNA可在人胎盤中特異表達，其特有的基因調控功能可能與PE發病密切相關。我們前期研究發現：miRNA在PE與正常胎盤中的表達存在很大差異，通過miRNA靶基因預測，初步篩選出了與PE發病相關的miRNA(miR-152,18a,30a-3p)，由此推測miRNA可能在維持妊娠過程中發揮重要作用，其表達失衡可能參與了PE發病過程。本項目擬在前期研究基礎上，套用Northern blot、螢光實時PCR、原位雜交等方法進一步篩選和驗證正常與PE胎盤中差異表達的miRNA；採用過表達和特異性抑制技術干預胎盤滋養細胞中miRNA的表達，檢測其對靶基因表達的調控效應及對滋養細胞增殖、凋亡、浸潤功能的影響。以期進一步闡明PE發病的分子機制，為提高其診療水平提供依據
結題摘要
1. 選取10個miRNA，套用Real-time RT-PCR進行驗證，其中8個miRNA與晶片結果相符：miR-210、miR-152與miR-518b在sPE胎盤中表達升高（P＜0.05），miR-377、miR-411、miR-542-3p、miR-18a與miR-363在sPE胎盤中表達下降（P＜0.05）；2. 通過TargetScan與PITA預測系統對靶基因預測發現：在miR-30a-3p、miR-152與miR-18a的可能的作用靶點中，分別包括IGF1、HLA-G與ESR1等與PE發病相關的基因；3. 細胞浸潤結果提示過表達mir-10b後，實驗組細胞的侵襲率顯著性升高（P＜0.05）；4. 套用六種靶基因預測軟體證實miR-18a與其靶基因ERα之間的靶向調控關係。血漿激素水平檢測顯示正常孕婦組血漿中雌二醇水平明顯高於子癇前期孕婦組（P＜0.05）；免疫組織化學檢測結果顯示兩組胎盤組織中均有ERα陽性表達，子癇前期組ERα在細胞滋養細胞的細胞質內或細胞核內的陽性表達率高於正常孕婦組（P＜0.05）。RT-PCR結果顯示正常孕婦組和子癇前期孕婦組均有ERα表達，對比顯示子癇前期組ERα表達高於正常孕婦組（P＜0.05）。Western-blot結果顯示ERα在蛋白水平的表達子癇前期組高於正常孕婦組（P＜0.05） 5. 在JEG-3細胞中過表達與抑制miR-18a後，RT-PCR結果顯示轉染後JEG-3細胞中miR-18a的表達受調控後升高和降低顯著；ERα mrna水平表達在轉染前後差異顯著（P＜ 0.05），受miR-18a負性調控顯著；Western-blot結果顯示ERα在蛋白水平的表達也受到miR-18a的負性調控。 6. 流式細胞技術檢測結果顯示，過表達與抑制miR-18a後，各實驗組與對照組比較細胞的增殖能力無明顯差異(P＞0.05 )；降調節miR-18a的表達可明顯增加細胞的凋亡率（P ＜0.05）；細胞浸潤實驗發現，降調節miR-18a的表達可明顯降低JEG-3 細胞的侵襲能力（P＜0.05）。 7. 流式細胞術結果發現，miR-30a-3p過表達與抑制後，各實驗組與對照組在細胞周期中增殖能力方面無差異（P＞0.05）；凋亡結果顯示過表達miR-30a-3p組可明顯增加滋養細胞凋亡率（P ＜0.05）。
