差異顯示

是利用一系列的oligo(dT)引物，逆轉錄真核生物細胞中全部表達的mRNA，通過PCR擴增的方法，轉換成cDNA雙鏈，再利用變性聚丙烯醯胺凝膠電泳，將有差異的片段分開，篩選出目的基因。

基本介紹

• 中文名：差異顯示
• 技術優勢：比較快速
• 領域：基因的鑑定與克隆
• 差異片段：差異片段可作為探針

技術發展

1992年，梁朋和Pardee首次提出差異顯示技術(DD-PCR)，並且利用這一技術克隆了幾個基因。由於該技術具有快速、靈敏、簡單和可分析低豐度mRNA的優點，很快成為克隆新基因和研究植物基因表達的有力工具。這項技術最初用於醫學研究上，近年來已開始在高等植物研究中套用，為研究高等植物的發育、生理代謝、基因表達提供了重要的技術手段。

技術步驟

從植物組織中提取總RNA

在這個步驟中注意不能有DNA污染，一般用無RNA酶的DNA酶在37℃下處理30 min

以Oligo T11MN 為引物(M為G、A、C中的任一種，N為A、C、G、T任一種)，進行逆轉錄

擴增cDNA的第一條鏈

使差異表達的cDNA片段在6%測序膠上分開

從膠上切割下來，並回收，再進行第二次擴增；

差異片段

差異片段可作為探針；

驗證目的片段，去掉假陽性片段；

從基因組文庫中篩選出相應的全長基因。

技術優勢

差異顯示技術由於充分利用PCR技術和反轉錄，因此比較快速，且利用該技術能夠觀察細胞中mRNA的組成，了解植物不同發育階段或不同環境條件下的細胞之間的差異表達，克隆目的基因。

套用領域

研究激素對植物發育的影響

研究植物發育過程

研究抗病機制

研究次生代謝途徑

研究抗冷機理