代表性差異顯示

代表性差異顯示是通過突變型基因組之間的差異比較來分離和鑑定突變基因的方法。以野生型基因組DNA為Tester,以突變型DNA 為Driver可獲得缺失序列; 相反以突變型DNA 為Tester,野生型DNA 為Driver 可獲得重排和擴增的基因。

在對雙方DNA 進行差式分析前，均用一種能識別鹼基序列的限制酶作切割處理，兩者總量比為1: 100,第二次增加到1:400，第三次增加到1:8000,再利用PCR 以指數形式擴增雙鏈模板，而僅以線性形式擴增單鏈模板這一特性，通過降低CDNA 群體複雜度和多次更換CDNA 兩端接頭來特異擴增目的基因片段。特別是Tester 與Driver 雜交反應後僅設定了72C復性與延伸及95C變性這兩個循環參數，共20個循環，從而使PCR 產物特異性大大提高。此技術最大的優勢是差異條帶在Northern 印跡在對雙方DNA 進行差式分析前，均用一種能識別鹼基序列的限制酶作切割處理，兩者總量比為1: 100,第二次增加到1:400，第三次增加到1:8000,再利用PCR 以指數形式擴增雙鏈模板，而僅以線性形式擴增單鏈模板這一特性，通過降低CDNA 群體複雜度和多次更換CDNA 兩端接頭來特異擴增目的基因片段。特別是Tester 與Driver 雜交反應後僅設定了72C復性與延伸及95C變性這兩個循環參數，共20
個循環，從而使PCR 產物特異性大大提高。