尼龍毛柱是免疫學中一種用於分離T細胞的分離柱。由於在研究體內及體外的免疫系統時，分離淋巴細胞群是一個關鍵步驟。而市場上並沒有針對B細胞的特異性抗血清，所以分離淋巴細胞中的T細胞並不是十分方便。
基本介紹
- 中文名：尼龍毛柱
- 學科：免疫學
- 用途：用於分離T細胞的分離柱
- 目的：保護T細胞
簡介,操作方法,
簡介
T細胞尼龍毛分離法利用了尼龍毛對B細胞的親和力，從而使T細胞在沒有嚴重損傷的情況下達到的足夠的純度。該方法不像流式和磁珠費用昂貴，而且操作簡便，所需要的條件也不高，是一種非常實用的方法。
操作方法
1.秤取1.5g尼龍毛裝入20-30ml玻璃容器或注射器內，填料的體積控制在15毫升左右。因為尼龍毛的鬆緊關係到T細胞的回收率，所以要特別注意。注射器下端配接5厘米左右長的帶有彈簧夾的橡皮管。
2. 加入大量的PBS平衡柱子後，用鋁箔包裹，並置於適當的容器內，高壓滅菌15分鐘。
（商品化尼龍毛柱以上步驟可以省略，經過PBS平衡後可以直接進行下列步驟。）
3. 滅菌的尼龍毛柱垂直固定後放於超淨台內，頂部以鋁箔覆蓋，避免污染。
4. 注射器下端，橡皮管，彈簧夾用無水酒精消毒。打開彈簧夾調節流速在大約3-4ml/min。
5.首先，加入3-4倍柱體的無血培養基平衡，之後加入相同體積的含有血清的培養基平衡（上述培養基都要預熱），最後等培養基液面接近柱填料液面時，關閉彈簧夾。
6. 樣本細胞懸浮液濃度控制在約5×108cells/ml，上樣量一般是1/3-1/5柱體積。樣品加入之後，再加入少量培養液，然後關閉彈簧夾。
7.覆蓋鋁箔，垂直固定，置於消毒過的容器中，於培養箱內37℃孵育1小時。此過程中柱子必須要保持垂直狀態。
8. 從培養箱中拿出柱子，置於超淨台內，除去鋁箔。接上按照4.中的方法消毒的彈簧夾和橡皮管，加入適當體積經37℃預熱的培養基，打開彈簧夾控制流速在3-4 mL/min，流出約5ml之後，流出的培養液基變得不透明，此時其中含有T細胞，收集這一部分培養基。
9. 基本上何時結束收集取決於流出液體中細胞的濃度，實際上，收集的量達到一個柱體積時就可以停止收集，因為即使收集更多的量，回收率幾乎不會增加。
10.上述操作後，細胞的
回收率為： 15~20 %
T細胞含量： 85~95 %
B細胞污染率： 1 5 %
多數細胞被確定為T細胞。
（注）收集粘附於尼龍毛上的細胞時，將T細胞收集完畢後的尼龍毛再無菌操作的狀態下取出，轉移到適當的容器中，用鑷子小心的將尼龍毛鬆開，粘附的細胞可以洗到培養基中。或者將注射器芯插入注射器內，通過壓力使的粘附的細胞隨著液體流出。
