小鼠腎臟主動鈣轉運機制的研究

小鼠腎臟主動鈣轉運機制的研究

《小鼠腎臟主動鈣轉運機制的研究》是依託湖南師範大學,由鄭維擔任項目負責人的面上項目。

基本介紹

  • 中文名:小鼠腎臟主動鈣轉運機制的研究
  • 項目類別:面上項目
  • 項目負責人:鄭維
  • 依託單位:湖南師範大學
項目摘要,結題摘要,

項目摘要

腎臟遠曲小管細胞的主動鈣轉運由離子鈣與胞漿內維生素D依賴的鈣結合蛋白Calbindin D9k和Calbindin D28k結合、移動至基底膜後排出。然而,胞漿內鈣的分子轉運機制及Calbindins的作用大小並未完全清楚。本項目構建維生素D受體(VDR)/Calbindin D9k和Calbindin D9k/Calbindin D28k雙基因剔除鼠,檢測包括對照組在內七種不同基因型鼠的血尿參數值、骨質和甲狀旁腺等的變化,再分離腎小管細胞,提取mRNA和蛋白質,運用基因晶片和蛋白質晶片、Real time PCR和Western雜交等技術檢測相關基因mRNA和蛋白質的表達。通過組間比較分析,發現所有參與鈣轉運的基因和蛋白。不僅驗證Calbindins的作用,並發現新的基因蛋白。從而闡明小鼠腎臟遠曲小管胞漿內主動鈣轉運的分子機制,為骨質疏鬆症、佝僂病等的預防和治療提供新的思路和途徑。

結題摘要

一、方法:通過構建VDR SiRNA慢病毒質粒,將其轉染小鼠腎小管上皮細胞,利用螢光定量檢測α-SMA mRNA 表達;利用MTT法檢測腎小管上皮細胞增生情況,將腎小管上皮細胞分成空白對照組、5×10-8 M 的 1,25(OH)2D3組、1×10-7 M 的PTH組、5×10-8 M 的 1,25(OH)2D3與1×10-7 M 的PTH組4組,利用基因晶片檢測包括Calbindin-D9k對Calbindin-D28k、TRPV5/6、VDR、NCX1、PMCA1b在內的各組細胞全基因表達;利用免疫組化技術檢測腎病綜合徵患兒腎組織中CaSR表達。結果:成功分離了腎小管上皮細胞,Calbindin-D9k SiRNA可有效抑制腎小管上皮細胞中Calbindin-D9k基因與蛋白表達;基因晶片結果顯示:Calbindin-D9kSiRNA組與正常組相比:表達上調基因數為2567個,表達下調基因數為2568個;在TRPV5、TRPV6、Calbindin-D9k和Calbindin-D28k等維生素D依賴的靶蛋白中, Calbindin-D9k部分抑制後,僅TRPV6出現表達差異;在腎病綜合徵患兒腎組織中,CaSR表達增高,並與鈣磷代謝紊亂、腎小管間質損害程度正相關。 二、探討腸道腫瘤進程中維生素D與APC/β-catenin的信號通路之間的互動關係。合併維生素D受體失活的APCmin/+小鼠通過交配傳代獲得,比較不同年紀大小的APCmin/+和APCmin/+VDR-/-小鼠腸道腫瘤的發生、發展情況,3,4,6,7月齡的兩組小鼠的小腸和結腸腫瘤的數目無明顯差異,然而,所有年紀APCmin/+VDR-/-小鼠腫瘤的大小明顯增加。免疫染色顯示APCmin/+VDR-/-小鼠腸道腫瘤的β-catenin, cyclin D1, 磷酸化的Stat-3和MSH-2表達明顯增強,而Stat-1表達降低。這些數據顯示VDR信號通路抑制腸道腫瘤的生長而不是其發生,APCmin/+VDR-/-小鼠腸道腫瘤增長的勢頭似乎是由於VDR生長抑制作用的喪失引起。

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