小肽轉運體2在前列腺組織中的功能性表達研究

《小肽轉運體2在前列腺組織中的功能性表達研究》是依託浙江大學，由蔣惠娣擔任項目負責人的面上項目。

基本介紹

• 中文名：小肽轉運體2在前列腺組織中的功能性表達研究
• 依託單位：浙江大學
• 項目負責人：蔣惠娣
• 項目類別：面上項目

項目摘要

前列腺腺管上皮血-前列腺屏障的存在，限制了藥物進入前列腺組織，使前列腺疾病成為世界性治療難題。研究前列腺組織中轉運體的功能性表達，將為前列腺疾病治療藥物的設計提供解決途徑。小肽轉運體2（PEPT2）是一種高親和力低容量的轉運體，底物譜廣，二肽、三肽及擬肽類化合物均可作為其底物。我們前期發現，小鼠前列腺中PEPT2 mRNA及蛋白豐富表達，且可能位於血-前列腺屏障，但不清楚其在人前列腺中的表達及定位，也不清楚其在介導底物跨血-前列腺屏障轉運中的作用。本課題首先考察小鼠和人前列腺中4種小肽轉運體的表達，明確PEPT2為前列腺中主要的小肽轉運體；然後以免疫組化法確證PEPT2是否位於血-前列腺屏障；並採用PEPT2轉基因小鼠、促甲狀腺激素及siRNA技術干預，在細胞、組織及整體動物水平進行經典底物攝取/轉運研究，闡明前列腺中的PEPT2在介導底物跨血-前列腺屏障轉運中的作用。

結題摘要

寡肽轉運體為質子依賴的一類攝取型轉運體，主要包括PepT1、 PepT2、PhT1、PhT2。研究發現，由於“血-前列腺”屏障的存在，使很多藥物不能在前列腺組織及腺泡內達到治療濃度。本項目旨在闡明前列腺中POTs的表達、功能以及在疾病狀態下的變化，為前列腺疾病治療藥物設計提供參考。 本課題研究發現PepT2和PhT1的mRNA在前列腺中表達較高，但僅有PepT2蛋白顯示免疫條帶。進一步研究發現，PepT2主要在前列腺上皮細胞頂側，在基底細胞中也略有表達；通過考察不同年齡小鼠前列腺組織中PepT2的mRNA和蛋白表達，發現在小鼠發育階段，PepT2 mRNA和蛋白表達均隨周齡增大而增加，成年（8周齡）後趨於平穩，表明PepT2在性成熟的前列腺中發揮作用。人前列腺組織的研究發現，PepT2和PhT2 mRNA表達水平較高，PhT1較低，而PepT1未檢測到。通過比較前列腺增生和前列腺癌的臨床樣本的POTs表達，發現前列腺癌樣本中PepT2、PhT1的mRNA和蛋白表達水平均顯著低於前列腺增生樣本，推測腫瘤環境可能影響PepT2和PhT1的表達。 為闡明前列腺腫瘤中POTs表達的變化是否與炎症有關。我們考察了炎症環境對POTs表達的影響，以致炎因子IFNγ和TNFα誘導刺激細胞產生炎症反應後，檢測POTs表達，結果顯示IFNγ（50ng/mL）和TNFα（50ng/mL）刺激RWPE-1細胞48小時後，顯著誘導PhT2 mRNA表達（P<0.001），但卻使PepT2表達降低（P＜0.01），而在PC-3細胞中，IFNγ（50ng/mL）和TNFα（50ng/mL）作用48h後，PhT2 mRNA表達均顯著增加（P＜0.001），但對PepT2和PhT1的表達無顯著影響（P>0.05）。PhT2在RWPE-1和PC-3細胞中的基礎表達均較低，而致炎因子的刺激作用顯著誘導了PhT2的表達，表明炎症因子顯著上調PhT2表達，提示其在細胞免疫應激中可能有重要作用。 此外，在本基金資助下，我們還發現了脾臟中上述四種POTs的表達，明確了巨噬細胞中PepT2的表達顯著高於淋巴細胞，而PhT2在兩種細胞均有表達，進一步闡明了PepT2而非PhT2介導巨噬細胞中寡肽跨膜轉運，在巨噬細胞NOD1信號通路中發揮重要作用。上述結果，為進一步深入研究POTs 在免疫系統中的作用奠定了基礎。