《家蠶核型多角體病毒DNA聚合酶的複製功能研究》是依託江蘇大學，由陳慧卿擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：家蠶核型多角體病毒DNA聚合酶的複製功能研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：陳慧卿
- 依託單位：江蘇大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
家蠶核型多角體病毒(BmNPV)是桿狀病毒的模式病毒之一，是導致我國夏秋季蠶繭減產的重要原因。我們在長期對BmNPV功能基因分析的基礎上提出對該病毒的DNA聚合酶進行研究。BmNPV DNA聚合酶是一保守性很強的基因，含有各種真核生物和病毒DNA聚合酶的保守序列。BmNPV有其獨特的複製模式，但長期以來，人們對桿狀病毒DNA聚合酶在DNA複製過程中的功能了解不多。為了闡明該病毒的感染增殖的特性，本項目擬開展（1）病毒DNA複製相關因子的確定；（2）DNA聚合酶在主複製叉上DNA合成活性的鑑定；（3）跨損傷合成能力的分析。通過本研究以揭示該病毒的複製機制以及病毒與宿主之間的互作關係，為我國養蠶業的膿病防治、有效地利用該病毒作為生物防治提供理論參考。
結題摘要
家蠶核型多角體病毒(BmNPV)是桿狀病毒的模式病毒之一，是導致我國夏秋季蠶繭減產的重要原因。生命有機體在生長繁殖過程中的一個主要事件就是遺傳信息的傳遞，母代的遺傳信息經過DNA的精確複製得以傳遞給子代，在此過程中DNA聚合酶發揮著重要作用。由 BmNPV 基因組orf53編碼的家蠶核型多角體病毒DNA聚合酶（BmNPV-POL）就扮演著這一重要角色。目前國內外對BmNPV-POL的研究很少，一個關鍵的原因是得不到高純度的目的蛋白。為了闡明該病毒的感染增殖的特性，本項目首先對該基因序列進行了密碼子最佳化，用E.coli系統表達出BmNPV-POL蛋白。為了得到高酶活的BmNPV-POL蛋白，本研究又利用MultiBac桿狀病毒-昆蟲細胞表達系統來表達帶His標籤的融合蛋白。利用Superose 6分子篩確定了BmNPV-POL的分子量約為110KDa，在昆蟲細胞內裝配純化出的目的蛋白是單體形式。用poly(dA)/oligo(dT)或者M13為模板考察BmNPV-POL 的 DNA 持續合成能力，均發現BmNPV-POL有很高的酶活。研究發現KCl和DMSO對BmNPV-POL蛋白有抑制作用。該酶對aphidicolin非常敏感，很少的劑量就使得酶活性急速下降。另外，本研究利用M13做模板檢測目的蛋白的延伸活性，發現BmNPV-POL在複製過程中不依賴RFC，但SSB可以刺激BmNPV-POL的活性。這一結果為桿狀病毒DNA複製機制的研究打下理論基礎，也為由於BmNPV引起的家蠶膿病的生物防治以及用家蠶做生物反應器等商業套用提供基礎。
